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酶联化学发光免疫分析(CLEIA)采用酶标记抗原或抗体进行免疫反应。免疫反应复合物中的酶随后作用于化学发光底物并产生发光信号,发光强度由酶浓度决定。
化学发光酶免疫中常用的酶标记物为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP);代表性发光底物包括鲁米诺、AMPPD、CSPD 以及新一代底物 CDP-star。在信号试剂作用下,使用化学发光仪完成发光信号检测。
明星产品:CDP-star化学发光系统是即用型高灵敏度检测平台,专为碱性磷酸酶(AP)标记检测设计,由CDP-star底物和化学发光增强剂组成。CDP-star底物是1,2-二氧杂环丁烷类AP底物,经AP脱磷酸化后,10分钟内达到发光峰值,信号稳定且持续数小时,可实现蛋白、核酸等生物分子的超高灵敏检测;增强剂可提升发光效率、抑制水淬灭、改善信噪比,适配膜基和溶液基检测。该系统背景低、光子产率高、稳定性好,适用于多种高灵敏度检测场景。
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碱性磷酸酶(AP)底物列表 |
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目录号 |
产品名称 |
CAS号 |
结构式 |
纯度 |
特点 |
规格 |
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F00211 |
CDP-star |
160081-62-9 |
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>98% |
新一代的碱性磷酸酶底物,CDP star通过在碱性磷酸酶的激活作用下以持续的速度发出光信号来进行检测,灵敏度高,发光时间从几分钟开始可以延续数天,所以可多次曝光并对曝光时间进行优化。是目前快速、灵敏的化学发光底物,曝光时间只需15-60秒。 |
100mg/1g/定制 |
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F00228 |
CDP-star Enhancer (10x) |
/ |
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/ |
化学发光增强剂,对于CDP-star和CSPD等AP酶底物增强效果明显。 |
25mL/定制 |
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F00212 |
CSPD |
142456-88-0 |
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>98% |
CSPD化学发光底物为广泛使用的荧光底物甲基伞形酮磷酸酯 (MUP) 和比色底物对硝 基苯磷酸盐 (pN PP) 提供了高度灵敏的替代物。低背景发光与高强度光输出相结合,能够以尽可能高的灵敏度和信噪比检测碱性磷酸酶标记。 |
100mg/1g/定制 |
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F00213 |
AMPPD |
122341-56-4 |
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≥98% |
AMPPD 在碱性条件下,被 AP酶解生成相当稳定的 AMP-D 阴离子,其有 2~30min 的分解半衰期,发出波长为470nm 的持续性光,在15min 时其强度达到高峰,15~60min 内光强度保持相对稳定。 |
100mg/1g/定制 |
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F00216 |
APS-5 |
193884-53-6 |
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≥99% |
APS-5是一种基于9,10-二氢吖啶的化学发光底物,它主要用于ELISA检测带有碱性磷酸酶AP共轭的化合物;APS-5结构中的9,10-二氢吖啶结构在AP的作用下可以持续稳定高效地发光, APS-5非常适合于磷酸酶活性溶液测定法和磷酸酶联免疫测定。 |
100mg/1g/定制 |
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F00201 |
4-甲基伞形酮磷酸二钠盐(4-MUP)
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22919-26-2 |
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≥99% |
4-甲基伞形酮磷酸二钠盐三水是AP发荧光底物/AP显色底物,它与碱性磷酸酶(AP)作用,其磷酯键分解,脱磷酸根基团后形成4-甲基伞型酮(4-MU),4-MU在360nm激发光的照射下,发出448nm的荧光。4-MUP-AP荧光体系是已知最方便和灵敏的荧光分析系统之一,对标记物AP的检测限可达10^-15M,整个反应过程不超过1h。 |
200mg/1g/5g/定制 |
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文献和实验检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测,我们通常使用碱性磷酸酶(AP)耦联的抗体,采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中,我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测,NBT/BCIP用于显色法检测。同时,对于膜杂交中的化学发光信号的检测,建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP
一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1.HRP-ECL 发光法: 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗,滤纸贴角吸干,反贴法覆于 A、B 混合液滴上,熄灯至可见淡绿色荧光条带(5 min 左右)后滤纸贴角吸干,置于保鲜膜内固定于片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒,根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1~2 min,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定
实验的最后一步,也是实验成败关键的一步。显色标记方法包括生物素标记、地高辛标记、各种酶标记等,酶标的底物有丰富的选择,显色方法也多种多样。其中主流的显色方法为酶促反应,该方法相较生物素反应更快也更安全。 酶促反应根据不同底物显色方法又分为化学发光和底物显色。化学发光法灵敏度高,可达pg级;底物显色操作简单且成本低。目前最为人熟知的底物显色有HRP(辣根过氧化物酶,Horseradish Peroxidase)和AP(碱性磷酸酶,Alkaline Phosphatase)两种。
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