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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.156ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.312ng/mL-20ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗人RNF39单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的RNF39结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与RNF39含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人环指蛋白39(RNF39)ELISA试剂盒
英文名称:Human RNF39 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:0.312ng/mL-20ng/mL
灵敏度:0.156ng/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合人环指蛋白39(RNF39)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的RNF39会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别RNF39的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-RNF39-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中RNF39浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(ng/mL) | 20.00 | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.720 | 1.602 | 0.863 | 0.489 | 0.370 | 0.168 | 0.093 | 0.045 |
| 校正OD值 | 2.675 | 1.557 | 0.818 | 0.443 | 0.325 | 0.123 | 0.048 | 0.000 |

一.加样孵育
每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本,空白孔加等量样本稀释液;贴封板膜密封微孔板,置于 37℃恒温孵育箱,避光孵育 90min,保证抗原抗体充分结合。
二.首次洗板
轻柔弃去孔内液体,吸水纸上快速拍干;每孔加满洗涤工作液,静置浸泡 30s,甩干拍净;重复洗涤5 次,彻底去除未结合杂质,降低背景值。
三.加酶结合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体;轻微水平晃板混匀,重新封板,37℃避光恒温孵育 60min。
四.二次洗板
重复上述洗板操作 5 次,严格拍干孔内残留液体,杜绝残留洗液造成假阳性、数据偏差。
五.底物显色
避光条件下,每孔加入 90μL TMB 底物显色液,轻柔混匀;37℃避光精准孵育 10~15min,此时液体逐步显现蓝色,显色深浅与待测物含量正相关。
六.反应终止
严格遵循加样顺序,每孔快速加入 50μL 酸性终止液,轻晃微孔板充分混匀,蓝色即刻转为黄色,终止酶促显色反应。
七.上机读数检测
加终止液后15min 内,用酶标仪测定各孔 450nm 波长吸光度(OD 值);以标准品浓度为横坐标、OD 值为纵坐标绘制标准曲线,拟合方程计算待测样本目标蛋白浓度。
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