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文献和实验干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
,接头与插入片段之间有 9 bp 的 gap 需要补平(如图 6 ),这就是为什么 Tn5 建库在 PCR 之前必须进行 72℃ 反应 3min ,而且所用的 PCR 酶需是具有链置换功能的非热启动酶。 图 6. Tn5 文库缺口补平 传统建库方式需要经过 DNA 片段化、末端修复、接头连接、文库扩增等步骤,耗时较长,而使用 Tn5 转座酶进行文库构建,可将 DNA 片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为一步简单的酶促反应,极大缩短建库时间,提高工作效率。 图 7. 转座酶文库结构
对每个细胞核进行捕获和标记。 建库及测序:完成文库构建,并采用Illumina高通量测序仪器进行测序,获得测序数据。
和CAAT box的元件,在启动子的远上游区域含多个AT富含区,该启动子的发现对于研究植物中的糖代谢具有重要的意义。接头引物的相对位置如图3所示。 这种方法具有便于操作、实验线路简单的优点,但是特异性较差,产物需进一步杂交验证。 1.5 YADE法 Prashar等在扩增cDNA 3'端时采用“Y”形接头,以减少接头引物的单引物扩增。 其原理
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