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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.078ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.156ng/mL-10ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗大鼠TIMP3单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的TIMP3结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与TIMP3含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:大鼠组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)ELISA试剂盒
英文名称:Rat TIMP3 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:0.156ng/mL-10ng/mL
灵敏度:0.078ng/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合大鼠组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的TIMP3会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别TIMP3的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-TIMP3-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中TIMP3浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(ng/ml) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.699 | 1.593 | 0.875 | 0.490 | 0.323 | 0.175 | 0.095 | 0.034 |
| 校正OD值 | 2.664 | 1.558 | 0.841 | 0.455 | 0.289 | 0.140 | 0.060 | 0.000 |

一.试剂准备
将试剂盒平衡至室温(20-25℃),浓缩洗涤液按 1:20 稀释备用。
标准品按说明书进行梯度稀释,配制系列浓度标准曲线溶液。
二.实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、待测样品孔,空白孔仅加稀释液,其余孔分别加入标准品或待测样品,37℃孵育。
加酶标抗体:除空白孔外,每孔加入酶标抗体,轻轻混匀,37℃避光孵育。
洗涤:弃去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后甩干,重复洗涤 4-5 次,最后拍干残留液体。
显色:每孔加入 TMB 显色液,37℃避光孵育,孔内呈现蓝色。
终止:每孔加入终止液,混匀后颜色由蓝色转为黄色。
检测:在 450nm 波长下测定各孔 OD 值,15 分钟内完成读数。
三.关键提示
实验全程严格控温,孵育时使用封板膜避免蒸发。
洗涤需充分,否则易造成高背景、结果偏差。
显色液需避光,终止顺序与加样顺序保持一致,确保充分混匀。
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