牛促黄体生成激素(LH)ELISA试剂盒

商品属性：

产品名称	牛促黄体生成激素(LH)ELISA试剂盒	英文名称	Cattle LH ELISA Kit
灵敏度	0.0625ng/mL	检测范围	0.125ng/mL-8ng/mL
产品货号	A113662	用途	仅供科研研究实验

检测原理：

通过特异性抗牛LH单克隆抗体包被于微孔板，与样本中的LH结合形成固相抗体复合物。加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体后，形成“捕获抗体-LHA-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质，加入TMB底物显色，HRP催化TMB产生蓝色产物，在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

数据及参考曲线：

校准品浓度(ng/mL)	8.00	4.00	2.00	1.00	0.50	0.25	0.13	0.00
OD450/630值	2.682	1.615	0.874	0.488	0.317	0.167	0.097	0.026
校正OD值	2.656	1.589	0.848	0.462	0.291	0.141	0.071	0.000

实验原理:

该方法采用双抗体夹心ELISA技术：

微孔板预先包被特异性抗牛LH单克隆抗体（捕获抗体）；

加入待测样本后，样本中的LH与固相抗体结合；

随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体，形成“捕获抗体-LHA–检测抗体”复合物；

洗涤后加入HRP标记的亲和素（若使用生物素-亲和素系统），再加入TMB底物显色；

HRP催化TMB生成蓝色产物，酸性终止液使其变为黄色；

在450nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与LH胰淀素浓度呈正比，通过标准曲线计算浓度。

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实验步骤：
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1.平衡试剂：试剂盒室温平衡 30 min，浓缩洗涤液按比例稀释备用。

2.加样：设空白孔、标准品孔、样品孔，每孔加对应标准品 / 稀释后样本，封板温育。

3.温育反应：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗体结合。

4.洗板：弃液甩干，洗涤液注满每孔，浸泡后拍干，重复洗板3–5 次。

5.加酶结合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 标记抗体，封板 37℃再次温育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，彻底洗净未结合游离酶标物。

7.显色：每孔先后加入 A、B 显色液，避光 37℃显色 10–15 min。

8.终止读数：加终止液终止反应，颜色由蓝变黄；立即用酶标仪在对应波长测定 OD 值。

9.结果计算：以标准品浓度、OD 值绘制标准曲线，换算样本待测指标浓度。