小鼠激肽释放酶3(PSA)ELISA试剂盒

商品属性：

产品名称	小鼠激肽释放酶3(PSA)ELISA试剂盒	英文名称	Mouse PSA  ELISA Kit
灵敏度	7.8pg/mL	检测范围	15.6pg/mL-1,000pg/mL
产品货号	A115570	用途	仅供科研研究实验

检测原理：

通过特异性抗小鼠PSA单克隆抗体包被于微孔板，与样本中的PSA结合形成固相抗体复合物。加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体后，形成“捕获抗体-PSA-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质，加入TMB底物显色，HRP催化TMB产生蓝色产物，在酸性终止液作用下变为黄色。颜色深浅与PSA含量成正比，酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

数据及参考曲线：

校准品浓度(pg/mL)	1000.00	500.00	250.00	125.00	62.50	31.25	15.63	0.00
OD450/630值	2.697	1.603	0.809	0.495	0.329	0.170	0.094	0.034
校正OD值	2.664	1.569	0.776	0.462	0.296	0.136	0.060	0.000

实验原理:

该方法采用双抗体夹心ELISA技术：

微孔板预先包被特异性抗小鼠PSA单克隆抗体（捕获抗体）；

加入待测样本后，样本中的PSA与固相抗体结合；

随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体，形成“捕获抗体–PSA–检测抗体”复合物；

洗涤后加入HRP标记的亲和素（若使用生物素-亲和素系统），再加入TMB底物显色；

HRP催化TMB生成蓝色产物，酸性终止液使其变为黄色；

在450 nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与PSA浓度呈正比，通过标准曲线计算浓度。

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实验步骤：
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一.加样孵育

每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本，空白孔加等量样本稀释液；贴封板膜密封微孔板，置于 37℃恒温孵育箱，避光孵育 90min，保证抗原抗体充分结合。

二.首次洗板

轻柔弃去孔内液体，吸水纸上快速拍干；每孔加满洗涤工作液，静置浸泡 30s，甩干拍净；重复洗涤5 次，彻底去除未结合杂质，降低背景值。

三.加酶结合物孵育

除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体；轻微水平晃板混匀，重新封板，37℃避光恒温孵育 60min。

四.二次洗板

重复上述洗板操作 5 次，严格拍干孔内残留液体，杜绝残留洗液造成假阳性、数据偏差。

五.底物显色

避光条件下，每孔加入 90μL TMB 底物显色液，轻柔混匀；37℃避光精准孵育 10~15min，此时液体逐步显现蓝色，显色深浅与待测物含量正相关。

六.反应终止

严格遵循加样顺序，每孔快速加入 50μL 酸性终止液，轻晃微孔板充分混匀，蓝色即刻转为黄色，终止酶促显色反应。

七.上机读数检测

加终止液后15min 内，用酶标仪测定各孔 450nm 波长吸光度（OD 值）；以标准品浓度为横坐标、OD 值为纵坐标绘制标准曲线，拟合方程计算待测样本目标蛋白浓度。