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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
充足
- 规格:
1000U
产品名称:Taq DNA连接酶(Thermus aquaticus DNA Ligase)
产品货号(型号):EG20201S
产品规格:1000 U(单位)/支,通常为20 μL(浓度约50 U/μL),具体体积请以实物标签为准;未提供规格信息
核心优势:
- 热稳定型DNA连接酶,最适反应温度为65–75℃,适用于高温连接(如TA克隆、PCR产物直接连接、缺口修复等);
- 无需ATP依赖(区别于T4 DNA连接酶),采用NAD+作为辅因子,反应体系更简洁、背景更低;
- 高特异性与连接效率,对平末端及黏性末端均具活性,尤其适用于高保真克隆与多重连接反应;
- 经大肠杆菌重组表达、亲和纯化,无RNase/DNase污染,兼容下游测序与转化实验;
- 愚公生物严格质控,每批提供活性检测报告(含单位定义:1 U指在65℃、1× Taq DNA Ligase Buffer条件下,30 min内将1 nmol DNA寡核苷酸双链连接所需的酶量)。
同系列产品:
- EG20201M — Taq DNA连接酶 5000 U
- EG20201L — Taq DNA连接酶 10000 U
- EG20202S — Taq DNA连接酶(含10× Buffer + NAD+)1000 U
- EG20205S — Taq DNA连接酶(热启动修饰型)1000 U
- EG20101S — T4 DNA连接酶 1000 U(对照款)
FAQ:
- Q:Taq DNA连接酶是否需要ATP?
A:不需要。Taq DNA连接酶以NAD+为辅因子,而非常规的ATP,避免ATP降解干扰,提升高温反应稳定性。 - Q:能否用于平末端连接?
A:可以,但效率低于黏性末端;建议延长连接时间(60–90 min)或提高酶量(1.5–2×),并确保DNA末端磷酸化充分。 - Q:反应后是否需失活?
A:推荐75℃加热10 min终止反应,因该酶具有热稳定性,常规65℃保温无法完全失活。 - Q:是否兼容商业化克隆试剂盒(如TA/Blunt-Plus)?
A:兼容,但需确认试剂盒缓冲体系是否含NAD+;愚公配套Buffer已优化pH与离子强度,建议优先使用EG20202S中所配10× Buffer。 - Q:储存条件与反复冻融影响?
A:-20℃保存,避免反复冻融;建议分装使用,首次融化后可短期(≤2周)置于4℃避光保存,活性下降<10%。
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文献和实验。 由此题我发现,目的基因由两种限制酶切割,一端由EcoRI切出黏性末端,另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开,一端由EcoRI切出黏性末端,另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时,两个黏性末端碱基互补,由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键,这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上,并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论:DNA连接
product is obtained. 5.Taq DNA Polymerase. Usually 1-1.5u of Taq DNA Polymerase are used in 50µl of reaction mix. Higher Taq DNA Polymerase concentrations may cause synthesis of nonspecific products. However, if inhibitors are present in the reaction
相关专题 重组DNA技术工具酶 连接酶旧称“合成酶”。DNA连接 酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接 酶
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