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文献和实验量都为 50 μ l,浓度分别为 300n g/L ,200 n g/L ,100 n g/L ,50 n g/L , 25 n g/L)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品 10 μ l(样品最终稀释度为 5 倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀 。 3. 温育:用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟
优化法:首先须知模板DNA量,引物和dNTP的浓度和设定的PCR循环参数。反应中的PCR缓冲液中不加Mg2+ 。Mg2+ 是从10mmol/L MgCl2贮存液中逐一加入反应管中。开始以0.5mmol/L递增(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5~5.0mmol/L),在确定了Mg2+ 的适宜浓度以后,再以0.2mmol/L递增和递减n个浓度,来确定Mg2+ 的最适浓度。
Labeling Muscle Actin with N-(1-pyrene)iodoacetamide
Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP,0.2 mM CaCl2,2 mM Tris-HCl,pH 8.0 at 4℃,250 ml for day 0. 2.0.5 mM ATP,2 mM MgCl2,100 mM boric acid,pH 8.3 at 4℃,10 ml. 3.N-(1-pyrene)iodoacetamide (Molecular probes P-29,m.w.385) 4.50Ti tubes,small vial
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