小鼠外周血来源内皮祖细胞

小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠外周血单细胞悬液制备 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。 加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。 300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。 PBS 洗涤一遍。 加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项： 采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解

【共享】人外周血来源DC的培养心得

仅以此贴回馈园子这两年对我的帮助 我养树突状细胞一年多了，终于有点东西可以回馈丁香园带给我的帮助。 第一：淋巴细胞分离液一定要好，进口的PolymorphPrep（Axis-Shield）很不错。这个分离液可出现白雾状的两层 上面的是单核细胞层下面的是多核粒细胞层，上面的就是含有我需要的DC前体细胞。 第二离心力的问题：分离步骤450离心力 洗涤步骤400离心力。这个可以减少血小板。 第三：关于细胞少的问题：经过我多次分离血，发现50毫升的外周血铺板一个6孔板，第六天就集中

小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）的培养

养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本，参考文献改天附上（可能养这个的战友大多看过了）。 1. 取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！（6W-8W，以前用只一年左右的养出来外形也张牙舞爪，但流式检测没有CD11c表达，很奇怪