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文献和实验Strep-tag®技术是亲和纯化重组蛋白的常用工具,它基于自然界中最强的非共价相互作用之一,即生物素与链霉亲和素的相互作用。该纯化系统的突出特点是纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统,对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助,因此近些年来脱颖而出。 本文将从以下方面介绍Strep-tag®技术: 标签介绍 纯化原理 标签-配体 纯化步骤 系统特点 标签介绍 目前有2种广泛使用的Strep标签: 它们分别是: Strep-tag®II 8 aa小标签(Trp-Ser
of the protein folds into such a conformation. Second, most ECM proteins are at least to some extent glycosylated and often heavily so, and the use of the mammalian system offers the best approximation to the sugar structures present in the native form
型的蛋白,或进行高解析度的结构分析,愈来愈多的实验组选择哺乳类表达系统来生产融合蛋白。其原因为哺乳动物细胞生产出的重组蛋白与人类蛋白十分相似,有较完整的蛋白折叠、组合及翻译后修饰[3]。因此,愈来愈多科学家们更加关注于—如何从哺乳类细胞中高效的纯化目标蛋白。1 亲和标签的选择首先,需考虑选择合适的亲和标签。常用于哺乳动物表达系统的亲和标签有 His-tag、FLAG-tag、GST-tag及 Strep-tag® 等[4-12],整理于下表:(点击放大查看)这些亲和标签在使用上各有千秋。使用
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