人Apelin13蛋白(AP13)ELISA试剂盒

商品属性：

产品名称	人Apelin13蛋白(AP13)ELISA试剂盒	英文名称	Human AP13  ELISA Kit
灵敏度	125pg/mL	检测范围	250pg/mL-8000pg/mL
产品货号	A099893	用途	仅供科研研究实验

检测原理：

通过特异性抗人AP13单克隆抗体包被于微孔板，与样本中的AP13结合形成固相抗体复合物。加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体后，形成“捕获抗体-AP13-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质，加入TMB底物显色，HRP催化TMB产生蓝色产物，在酸性终止液作用下变为黄色。颜色深浅与AP13含量成正比，酶标仪在487nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

数据及参考曲线：

校准品浓度(pg/mL)	8000.00	4000.00	2000.00	1000.00	500.00	250.00	125.00	0.00
OD450/630值	2.706	1.532	0.825	0.493	0.365	0.162	0.099	0.038
校正OD值	2.668	1.494	0.787	0.456	0.327	0.124	0.062	0.000

实验原理:

该方法采用双抗体夹心ELISA技术：

微孔板预先包被特异性抗人AP13单克隆抗体（捕获抗体）；

加入待测样本后，样本中的AP13与固相抗体结合；

随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体，形成“捕获抗体–AP13–检测抗体”复合物；

洗涤后加入HRP标记的亲和素（若使用生物素-亲和素系统），再加入TMB底物显色；

HRP催化TMB生成蓝色产物，酸性终止液使其变为黄色；

在450 nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与AP13浓度呈正比，通过标准曲线计算浓度。

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关键实操技巧：
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1.加样技巧

一次性换新枪头，垂直贴孔壁低位加液；避免气泡、飞溅交叉污染；整板加样速度均匀统一。

2.温育控温

须37℃恒温、封板膜严实防蒸发冷凝；时间严格卡死，过长背景高、过短信号低。

3.洗板核心

每孔注满不溢出，浸泡≥30 s；拍干用无尘吸水纸，杜绝残留；洗板不足直接高背景、假阳性。

4.样本规范

杜溶血、脂浊、污染样本；禁止反复冻融；严禁含 NaN₃抑制 HRP 活性；浓度超标只用试剂盒配套稀释液。

5.显色与读数

全避光；整板显色时长一致；加终止液立刻读数，放置越久数值漂移越大。

6.基础质控

样本、标准均做复孔；室温洁净避光操作；试剂分装取用，减少反复开盖失效。