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文献和实验Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
外周血是我们流式实验中常用到的样本之一。由于血液离体后会在凝血因子的作用下凝固(图1),采集外周血样本时,需要使用带抗凝剂的采血管,或采集后立即加入抗凝剂。通常,我们流式实验中用到的抗凝剂有两种:EDTA 和肝素。 图1:凝血(左)与抗凝(右)效果展示 1 两种抗凝剂的抗凝原理 EDTA(乙二胺四乙酸): EDTA 能与血液中的 Ca2+ 螯合,使 Ca2+ 失去凝血作用,阻止血液凝固。常用的是钠盐或钾盐。 肝素: 加强抗凝血酶(AT)灭活丝氨酸蛋白酶的作用,阻止凝血酶的形成和血
0.5M EDTA FW M L pH8.0 xg = 292.25 0.5 0.5 **93.06g** Add to about 300mls H2 O while spinning
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