PEI 25K Transfection Reagent 线

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25，000，一种高电荷阳离子聚合物，非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上，线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观，以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力，常用作黏附增强剂，作用同多聚赖氨酸（poly-lysine）；科研应用上，线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合，正是这一特性，使得成为一种非常行之有效的载体运输介质（Vector carrier），即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000（Polyethylenimine Linear, MW 25000）是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中，PEI在宽广的生产规模内（从96孔板到100L生物反应器）能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI25K的无菌溶液，浓度为1mg/ml，直接使用即可。按照DNA：PEI25K=1：3的比例来操作，1ml本品足以用来转染330μg DNA，或者，6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存：-20℃保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）收到本品或第一次使用，请根据单次用量分装后置于-20℃冻存，尽量降低反复冻融次数。

2）本品为无菌溶液，请操作过程中执行无菌操作。

3）请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度，260nm / 280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4）使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

5）对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6）对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

7）推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K，制备转染复合物。

8）转染过程请不要使用抗生素。

9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法（贴壁细胞）

1.1铺板

a）转染前18-24h进行铺板，调整合适的细胞密度（参考表1），使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】：高血清水平会抑制转染效率，大多数情况，低血清水平（≤5%）能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤（以6孔板的单孔为例）

a）转染前1-2h，每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b）制备PEI25K-DNA转染复合物（严格按照以下步骤进行）：①往300μl无血清培养基（比如：Opti-MEM I）加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀；②往混合物内加入6μl PEI25K（1mg/ml）（DNA/PEI25K=1：3），低速涡旋5s；③无菌环境，室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。

c）将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，使得复合物分散均匀。

【注意】：以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积（为培养总体积的10%）来进行放大或缩小（可参考表2）。

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培养箱内培养细胞，转染后12-18h，去除含PEI25K-DNA复合物的培养液，更换新鲜的生长培养基。

b）通常，转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。