Gelatin, Type B 明胶（B型）

基本介绍：

明胶（Gelatin）是一种由高平均分子量的水溶性蛋白组成的非匀质混合物，存在于胶原蛋白中。通过对皮肤、肌腱、韧带和骨头等组织煮沸后提炼所得。A型明胶（Type A Gelatin）来自酸水解的组织，B型明胶（Type B Gelatin）来自石灰水解的组织。

生物学研究，明胶的应用包括：1）包被细胞培养板以提高细胞的贴壁能力；2）加入PCR反应以稳定Taq DNA聚合酶活性；3）WB、ELISA和IHC实验中用作封闭剂；4）微生物学研究用作物种分化培养基组成成分之一；5）作为生物兼容性聚合物，明胶能用作运输载体来释放生化活性分子，或组织再生学中建立支架。工业领域，明胶的应用包括稳定剂、增稠剂和组织形成剂，用在食品中或橡胶替代品、粘合剂、水泥、平板印刷油墨、塑料、人造丝、照相底片和胶片等的生产制造中。医药工业中，明胶可用作助悬剂、包胶剂和药片粘合剂。兽医方面明胶可用作血浆扩容剂和止血剂。

本品以牛皮为原料，提炼自石灰水解组织所得，为B型明胶。本品以冻干粉形式提供，CAS NO：9000-70-8，凝胶强度~225 g Bloom，达细胞培养级别。用于细胞包被基质的推荐工作浓度为0.1-0.2 mg/cm2。

保存与运输方法：

保存：室温密封保存，数年稳定。

运输：室温运输。

注意事项

1）明胶冻干粉室温密封保存保持数年稳定。但在空气中加热到100°C，会膨胀变软，解聚产生一种碳质并伴随吡啶碱类和安气的产生。＜35-40°C明胶膨胀且吸收5~10倍体积的水产生凝胶。明胶溶于甘油和醋酸，在热水比冷水溶解性强。几乎不溶于大多数有机溶剂比如醇类、氯仿、二流化碳、四绿化碳、酯类、苯类、酮类和油。

2）Bloom number由凝胶强度测定计（Bloom gelometer）测定，指的是从已知浓度溶液的成胶强度。Bloom number越高，凝胶越强。Bloom number与平均分子量成正比。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、明胶溶液的制备

1.1 明胶的溶解

根据实验所需的明胶浓度，称取适量明胶粉末，加入含双蒸水或PBS缓冲液的容器内，按照以下两种方法之一：1）明胶经10 min浸泡后，用热水浴加热（温度不要超过70℃），搅拌直至完全溶解；2）明胶经10 min浸泡后用小火加热（温度不要超过70℃），并不断搅拌直至完全溶解；

1.2 明胶的除菌

按照以下两种方法之一：

1）高压灭菌：将配好的明胶溶液（常用浓度0.1%~2.0%之间）装入瓶内，121℃，15 psi，高压灭菌20min；

2）滤膜除菌：低浓度明胶溶液（如0.1%或0.2%）溶解后可用0.2μm滤膜除菌。但需多准备几个滤器，因为明胶相对比较难过滤。

1.3 明胶的保存

明胶溶液稳定性比较高，置于4℃保存能长期保持稳定。【注意】：温度提高会明显降低明胶强度和粘度，导致性能降低。

二、明胶溶液的包被方法

具体的使用浓度和使用量依据细胞类型和实验目的而定。

2.1 用组织培养级别的水配制2%（w/v）的明胶溶液；

2.2 121℃，15 psi，高压灭菌20-30 min；

2.3 按照5-10 μL明胶溶液/cm2（或0.1-0.2 mg/cm2）的比例包被培养皿/板/瓶表面。充分覆盖包被表面。

2.4 放置37℃培养箱，至少干燥2h。吸掉多余明胶溶液，用培养基或PBS缓冲液清洗一遍，晾干后即可使用。