碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）

产品描述

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一类磷酸酯酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)）利用的是金属沉淀法来定性检测磷酸酶活性。检测原理是以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经碱性磷酸酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，6个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   ALP染色液、ALP硫化液容易失效，建议开封后根据小份保存，避免重复性开盖使用，影响性能。

2）   ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，操作需小心。

3）   样本需新鲜，取材后请立即处理，否则会影响酶活性。

4）   组织固定需在4℃进行，时间不要超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

5）   组织在石蜡包埋时，温度不要超过56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸染，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

6）   石蜡切片脱蜡所用的二甲苯需用AR级以上的，不纯的二甲苯会分解黑色沉淀。

7）   冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

实验前准备材料：蒸馏水，温箱或水浴锅

一、 石蜡切片染色

1.1    石蜡切片脱蜡至蒸馏水；

1.2   切片入ALP染色液，37℃孵育2~12h；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

1.3    流动水清洗2min，入蒸馏水；

1.4    入硝酸古染液，37℃孵育5min；

1.5    流水洗5min，入蒸馏水；

1.6    准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

1.7    流水洗10min，入蒸馏水；

1.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

1.9    石蜡切片常规脱水、透明、中性树胶封片。

二、 冰冻切片染色

2.1 冰冻切片在丙同-氯仿等量混合液内，4℃固定2-5min；

2.2  切片入ALP染色液，37℃孵育5-15min；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

2.3 流水洗2min，入蒸馏水；

2.4 入硝酸古染液，37℃孵育5min；

2.5 流水洗5min，入蒸馏水；

2.6 准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

2.7    流水洗10min，入蒸馏水；

2.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

2.9    冰冻切片用甘油明胶封片剂封片。

三、 染色结果

阳性部位	黑色硫化钴沉淀
细胞核	红色（核固红）