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文献和实验血清培养基。2.贴壁时间:18-24h,如果不够,未悬浮的细胞会被吸掉。一般为了实验的准确,每个浓度可以设5-6个复孔,可以最后统计时,可以除去一个最高值和一个最低值,或者除去其中数据离谱的值,这些离谱数字的出现与细胞是否污染,细胞是否在培养期间死去,是否培养液蒸发过多,加MTT液是否准确,在37℃,5%二氧化碳培养箱中孵育时间是否一定(1-4小时)等有密切的关系,当然测定OD值的仪器工作状态是否正常也非常重要!(一般开机预热20min)。MTT方法的吸收度在0.2~0.8之间误差较小。这和分析化学中的
的吸光度说明如下: 260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280(R)体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度,质量较好的RNA的R值应在1.8~2.0之间,当R2.2时,说明RNA已经被水解成了单核苷酸。在对核酸进行吸光度检测时,需要注意稀释液应使用TEBuffer。 [Q3] 如何计算RNA的浓度? RNA浓度=(OD260-OD320)×稀释倍数×0.04 μg/μl。 [Q4
悬液要好,接种时应加含血清培养基。 2. 贴壁时间:18-24 h,如果不够,未悬浮的细胞会被吸掉。 一般为了实验的准确,每个浓度可以设5-6个复孔,可以最后统计时,可以除去一个最高值和一个最低值,或者除去其中数据离谱的值,这些离谱数字的出现与细胞是否污染,细胞是否在培养期间死去,是否培养液蒸发过多,加MTT液是否准确,在37 ℃,5%二氧化碳培养箱中孵育时间是否一定(1-4小时)等有密切的关系,当然测定OD值的仪器工作状态是否正常也非常重要!(一般开机预热
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