中华鳖源性成分探针法qPCR试剂盒（不含内参）

要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

、外泌体 miRNA qPCR 实验选用哪个基因做内参？ 答：外泌体 qPCR 目前没有公认内参基因，本公司检测 miRNA 做的是外参。外参可以最大限度降低对定量实验造成的干扰，适用于内参表达不稳定的外泌体或暂未发现合适内参的其他样品，对目的 microRNA 进行相对定量，替代内参作用。部分文献也会选取U6等作为内参。 16、下游 qPCR 检测时 CT 值过高如何处理？ 答：外泌体 RNA 是微量的存在，首先样品准备阶段确保样品的质量和数量充足（例如血清建议新鲜样本准备 2ml 以上）。有实验

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

如果您的样本是组织，取样的过程非常重要。组织内部是有内源性 RNase 存在的，组织离体后内源性 RNase 则开始发挥作用，RNA 产生降解。所以离体的组织必须立马放在液氮中速冻，之后转移至 -80℃ 长期保存，且避免反复冻融。研磨组织的过程中需要保证在液氮环境中研磨。RNA 提取的过程中，保证样本的上样量不超过提取试剂盒说明书中规定的最大上样量，上样量过多，同样会造成 RNA 降解。 ②如果您的样本是细胞，则样本搜集过程要简单的多了，只要保证细胞状态良好（细胞状态差也容易造成提取的 RNA 降解