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- 2026年04月23日
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一、项目介绍
细胞分泌因子流式检测是基于流式细胞术和免疫荧光标记的液相蛋白检测技术。它将不同大小/荧光强度的微球分别包被上针对不同分泌因子的捕获抗体，与样本中的靶标因子结合后，再加入荧光标记的检测抗体，形成“微球-捕获抗体-靶标因子-检测抗体”的复合物。通过流式细胞仪检测微球的散射光（区分不同微球）和荧光信号（定量靶标因子含量），实现对多种分泌因子的同时定量分析。
二、流式仪通道
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激发波长 |
通道 |
发射波长 |
常见染料 |
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488nm蓝色激光器 |
BL1 |
530BP |
FITC、AlexaFluor488等 |
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BL2 |
585BP |
PE、PI、DsRde等 |
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BL3 |
700BP |
PerCP-Cy5.5、PE-Cy5等 |
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BL4 |
785BP |
PE-Cy7等 |
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638nm红色激光器 |
RL1 |
660BP |
APC、AlexaFluor647等 |
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RL2 |
785BP |
APC-Cy7等 |
三、检测步骤
四、送检要求
样本准备：
细胞培养与刺激：将细胞接种于培养板中，根据实验目的加入刺激剂（如LPS、PHA、细胞因子等）或抑制剂，培养一定时间后（一般6-48小时，根据分泌因子的表达时间调整）收集上清液
样本预处理：
细胞上清：1500rpm离心5分钟，去除细胞碎片，可直接检测或分装后-80℃保存。
血清/血浆：避免溶血，离心去除血凝块，-80℃保存。
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文献和实验示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
4. 样本的固定保存或较长时间放置可能会影响细胞表面分子和抗体之间的结合，故建议尽可能使用新鲜样品. 三、操作方法 A ．小鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测步骤 （一） 样品制备 1. 取出小鼠淋巴组织块，迅速浸泡在 10ml 的 Staining
线粒体膜电位（MMP）：使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低，如双氰基-双己氧基羰基靛蓝，它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时，细胞的荧光就会减少。 磷脂酰丝氨酸（PS）在细胞表面的分布情况： PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中，PS残余物会曝露在细胞表面。这种变化可以通过复合蛋白钙依赖的磷脂结合蛋白V与PS结合来进行检测。所使用的细胞必须是未经修复的，因为钙低速的磷脂结合蛋白V不能到达完整细胞的内部。PI常
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