AN3CA 人子宫内膜腺癌(转移)细胞

   请收到细胞后，先在培养箱静置3-5小时后，再在倒置镜下(好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。 （一）如果细胞生长愈合度低于70%且细胞未大面积脱落，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出旧培养液，换8-10ml新鲜培养液后继续培养。（二）如果细胞大面积脱落，将细胞继续静置过夜，期间可不进行处理。等待第二天观察细胞，如果细胞大部分恢复贴壁，可参照（一或三处理）；如果细胞少部分贴壁，仍然大部分细胞漂浮，可将细胞悬液通过离心收集，用新鲜完全培养基重新接种至新的培养瓶中，旧培养瓶中的细胞更换新的完全培养基继续培养。

    如果细胞愈合度已经超过75%，即可进行传代培养。具体步骤如下： 1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。 2. 加0.7ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）（依据细胞消化难易程度可适当增减）于培养瓶中，后轻轻摇晃让消化液充分接触细胞，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，期间间隔5-10s用力拍打瓶壁两侧，等细胞大部分（大于50%）能拍打下来时，可将培养瓶转移至无菌生物安全柜中。 3. 轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中，按6-8ml/瓶补加完全培养基。如果没有特别说明，收到细胞后的次传代一般是一传二。