N-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)喹喔啉-6-胺/91

常用蛋白标签、序列及特性

常见表位标签和序列常用表位标签的生物化学特性总结如下：氯霉素乙酰转移酶（CAT）这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因，与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平，而不需要 PAGE 或免疫检测。二氢叶酸还原酶（DHFR）这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。FLAG带电的八肽序列（DYKDDDDK），可用于蛋白检测，特别是在串联为 3xFLAG™表位（DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK

【原创】真核表达His蛋白，进行天然构象蛋白纯化的心得和疑问。

的蛋白都掉下来。（第五道和第六道）最后，用洗脱液把His蛋白从树脂上洗下来（第七道）（感觉整个过程有点类似于质粒抽提。）然后，先说有用的：罗氏的树脂太TMD赞了。。据它自己说工作PH在3-10几，并且不掉Ni，不用recharge，省时省力，如果用500mM的咪唑洗脱之后，都不用清洗柱子就可以很干净。。据它自己说，wash buffer上一次就可以洗的相对比较干净。我以前用的某个C开头的米国货，纯化的我要死要活的。费N多时间在recharge、wash上，为了干净还得使用梯度洗脱，累个半死，蛋白

NI-NTA蛋白提纯的原理、步骤与常遇问题分析

3.5，会导致镍离子脱落 策略：改变洗脱办法，咪唑竞争性洗脱 可能原因：蛋白已沉淀在柱上 策略：减少上样量，或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度，或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲，或4-6 M 盐酸胍)。 可能原因：非特异性疏水或其他相互反应 策略：加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如：2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。 His 标签蛋白洗脱后杂带