甲醛肟(10%的水溶液，约2.4mol|L)/75-17-2

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

，直到全部溶解，用 HCl 调节 PH 值到 7.4； 2.加 10 ml 10% 的 NP-40； 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠，搅拌，直到溶液澄清； 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA，用量筒定容到 100 ml，2～8 ℃ 保存； 5.理论上，蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入（抑蛋白酶肽，亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl；PMSF，Na3VO4，NaF 各 500 μl），但是 PMSF 在水溶液中很不稳定，30 分钟就会降解一半，所以 PMSF 应该

手把手教你做好体外 DNA 重组

；3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700×g，离心 10 min。如果样品溶解得不好，再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液，重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质，重复抽提一次，将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中；4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇，12 000 rpm 离心 2 min；5. 用 70% 乙醇洗涤，晾干，沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋

目的基因片段的PCR扩增与克隆

) 0.5 总体积 50 取5μl检测是否为特异单带。若为特异单带，则直接用2倍预冷的乙醇沉淀（加1/10体积5mol/LNaAc，2倍体积乙醇，-20℃放置1小时或过夜。离心(12000g,20min)，沉淀用75%洗2次，DNA自然晾干，溶于1mol/LpH8.0的TE溶液中，贮于4℃待用）；若为多带，则琼脂糖凝胶电泳后，在长波紫外灯下切取目的DNA