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- 2026年03月12日
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百欧泰
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5 preps///10 preps
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文献和实验Studies of the Ubiquitin Proteasome System
of Small Interfering RNAs (siRNAs) to Reduce Expression of Ubiquitin‐Proteasome System Proteins in Cells Basic Protocol 13: Localizing Degradation to the Proteasome The NEDD8 Conjugation System Basic Protocol 14: Purification of APP‐BP1/Uba3 Complex (E1
只剩下3-4条杂带，这样后续的纯化就很方便了。因为色谱柱的纯化条件比较难optimize。 这段文字可以参考： 用Novagen公司《pET System Manual》提供的方法，分别进行细菌渗透休克，超声波裂解，研究融合蛋白在细胞周质，细胞质和包涵体中的分布。 渗透休克 用1.2.3方法诱导细菌（10ml体积），测菌液OD600，10000 r/min离心0.5 min去上清，加入渗透休克溶液1（V1= OD 600×V2/5，V1为渗透休克溶液1，V2为培养新鲜菌液），冰浴10 min
，-20℃保存上清、细菌沉淀。上清进行TCA沉淀，处理同上。沉淀用Protein Extraction Reagent（Ni-NTAHi Bind Purification Kit BugBuster. 提供 ）按 Novagen公司《pET System Manual》提供方法反复处理，洗涤包涵体。包涵体按培养菌100×OD600/3 ul体积加1% SDS溶解，加等体积2×SB，进行12% SDS-PAGE电泳分析，进行蛋白条带灰度扫描，计算融合蛋白Trx-PrPC27-30占细菌总蛋白的相对含量
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