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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.156ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.312ng/mL-20ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
检测原理:
通过特异性抗小鼠NPHN单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的NPHN结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与NPHN含量成正比,酶标仪在586nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:小鼠肾足蛋白(NPHN)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse NPHN ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
检测范围:0.312ng/mL-20ng/mL
灵敏度:0.156ng/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合小鼠肾足蛋白(NPHN)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的NPHN会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别NPHN的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-NPHN-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在586nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中NPHNQ
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(ng/mL) | 20.00 | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.718 | 1.592 | 0.808 | 0.496 | 0.364 | 0.168 | 0.100 | 0.044 |
| 校正OD值 | 2.674 | 1.548 | 0.764 | 0.452 | 0.321 | 0.124 | 0.056 | 0.000 |

操作步骤:
一、样本处理:
血清/血浆:避免溶血,2-8℃保存48小时;长期保存需分装冻存(-20℃或-70℃),避免反复冻融。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片,取上清液。
组织匀浆:使用生理盐水匀浆,离心取上清。
二、加样:
标准品孔:加入50μL不同浓度标准品(如80、40、20、10、5、2.5 U/L)。
样本孔:加入50μL待测样本(血清/血浆需1:2稀释)。
空白孔:不加任何液体。
三、温育与洗涤:
封板后37℃温育60分钟。
弃去液体,吸水纸拍干,加满洗涤液(350μL),静置1分钟,甩干,重复洗板5次。
四、显色与终止:
每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15分钟。
加入50μL终止液,混匀后颜色由蓝变黄。
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