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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Anaplasma spp. SYBR PCR Kit
- 供应商:
苏州丰度蛋白
- 规格:
50T
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文献和实验性缺点使出了各家的法宝,提出了有建设性和有新意的解决方案也让这个荧光检测技术继续焕发光彩。 染料法引物设计 最后,师兄(师兄微信号:shixiongcoming)再跟大家简单聊下染料法的引物设计。 首先,有人会问:「探针法和染料法的引物能不能通用啊 」,师兄想说的是,一般探针和染料法的引物设计原则上还是有差异的。 探针法的引物设计对于引物二聚体的要求没有染料法严格。我曾经自己是试过,用我探针的引物去做染料法的,但是条件必须要优化才能避免二聚体的生成。不过优化后的结果
苷酸多态性(SNP)有可能检测不到。9)推荐用HPLC纯化引物。虽然对于复制子的扩增没有太大影响,对NTC可能会有很大影响。10)尽管更长的扩增子也能进行反应,最适的扩增子长度应该是100-200bp。11)由于很多因素的影响扩增子的溶解温度会有一定变异。溶解温度会受特殊缓冲液的pH值,所用Taq聚合酶,SG和MgCl2浓度和其他因素的影响。要做溶解曲线的对比你首先要确保所用的条件相同。12)使用SG的一个主要不利因素是引物二聚体的非特异扩增。我们最近利用Qiagen的QuantiTectTM
所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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