- ￥5000
- 雅吉
- YS7309C
- 2026年03月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
雅吉生物
- 库存：
11
- 生长状态：
贴壁生长
- 运输方式：
顺丰快递
- 细胞形态：
上皮细胞样、多角形
- 英文名：
HT55-LUC+GFP
- 规格：
T25
一、人结肠癌细胞带荧光素酶和绿色荧光蛋白HT55-LUC+GFP培养条件
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培养条件 |
空气，95%；CO2，5% ；37℃ |
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生长特性 |
贴壁生长 |
冻存条件 |
无血清冻存液 |
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细胞背景 |
更新中 |
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传代方法 |
1:2~1:3 |
传代情况 |
2天换液 |
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备注 |
本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
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二、人结肠癌细胞带荧光素酶和绿色荧光蛋白HT55-LUC+GFP收货后处理
复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。
冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
细胞培养步骤
a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养。
贴壁细胞步骤如下：
1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2) 加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加6ml含10%血清的完全培养基终止消化；
3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀；
4) 按5-6mL每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培养基的6cm培养皿中或者T25培养瓶中。
（即1个T25瓶传代接种至2个T25瓶或者2个6cm的培养皿）
悬浮细胞传代步骤如下：
1、半换液法
半换液处理，竖着培养瓶在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后补给3ml的完全培养基，如果培养基变色慢，可直接加500ul左右FBS，传代的时候可以直接补给5ml培养基 分两个培养瓶培养，一般这样传代3次左右可以离心传代一次，去掉死细胞。
2、离心换液法
如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
b、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
人结肠癌细胞带荧光素酶和绿色荧光蛋白HT55-LUC+GFP注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养
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流式课堂 | 细胞带有 GFP 荧光时，如何进行流式凋亡分析？
随着生物研究进入基因时代，转染技术的应用越来越广泛。在此过程中，通常会引入 GFP（绿色荧光蛋白）标签，去验证转染是否成功。 在之前的流式课堂中，我们曾多次提到过流式配色问题。今天，就来带大家看看，带有 GFP 标签的细胞，在流式凋亡检测中，应该如何配色和分析结果。 一、如何选择试剂盒 挑选试剂盒时，需要选择干扰少的荧光组合。GFP 的激发/发射波长为 488/510，通常在流式细胞仪中的检测通道为 FL1。因此，我们不能选择荧光标签为FL1检测通道的凋亡检测试剂盒，如 AF488
的双荧光素酶检测报告基因试剂盒（DLR）（真的很好使，你数据做不好是你没好好研究这个系统，没优化好质粒），还有做microRNA的系统。 对于检测仪器，绿色荧光蛋白等一个是检测静态的，观测用荧光显微镜，例如看看带有GFP标签的融合蛋白在细胞中的定位啦；另外一个是检测动态的，用荧光光度计来检测，如在FRET实验中测能量迁移，如果是多功能检测仪，这时就看仪器检测模式中有没有检测fluorescence（荧光）一项，不同的荧光蛋白激发光和发射光的频率各不相同，检测是要注意设置仪器参数，频率不同
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