His标签蛋白纯化树脂 Ni-NTA His-Tag Pur

His标签蛋白琼脂糖纯化树脂产品信息

His标签蛋白琼脂糖纯化树脂以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。该产品可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

His标签蛋白纯化树脂产品属性

His纯化树脂使用案例

小量蛋白纯化操作方法（参考）

1. 样本准备（以大肠杆菌表达的蛋白纯化为例）
（1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
（2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体，然后加入菌液体积1/10的裂解缓冲液（添加PMSF，终浓度为1 mM），也可同时加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
（3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。
注：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
（4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
（5）收集上述澄清蛋白液至离心管中，10000 rpm，4℃离心20~30 min。取上清，置于冰上备用或 - 20℃保存。

2. His标签融合蛋白纯化
(1) 根据蛋白表达量取适量体积的 His纯化树脂至尖底离心管中，加入5倍树脂体积的漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，500 g离心5 min，弃上清。
(2) 重复漂洗一次，500 g离心5 min，弃上清。
(3) 向树脂中加入含His融合蛋白的大肠杆菌裂解液（总体积不要超过离心管体积的2/3)，放混匀仪上4 ℃孵育2~4 h。
(4) 4 ℃ 500 g离心5 min，弃上清。
(5) 加入10倍树脂体积漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，4 ℃ 500g离心5 min，弃上清；重复该漂洗操作两次，500 g离心5 min，弃上清。

3. 洗脱
(1) SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法（变性洗脱法）：得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。加入50 μL 2×SDS-PAGE上样缓冲液，95ºC加热5分钟。4 ℃ 12000 g离心 5 min，收集上清至新的离心管中。
(2) 非变性洗脱法：洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续检测（例如SDS-PAGE、Western-blot、质谱实验等）。每10 μL树脂，加入10 μL洗脱缓冲液，涡旋震荡20 s，放混匀仪上室温洗脱10~15 min，涡旋震荡20 s；4 ℃ 12000 g离心 5 min，收集上清至新的离心管中，- 80℃保存或直接用于后续实验。

注意事项

1. 本产品仅限于科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

品牌介绍:

广州辉骏生物科技股份有限公司成立于2011年，是一家由在生物医药领域具有资深科研资历人才组建的创新型科技企业，致力于为生物医药企业、高校、科研机构、医院及个人提供高品质科研外包技术服务和科研产品。

通过上十年的发展，辉骏生物已经组建起经验丰富的科研服务人才团队，建成了完善的蛋白质组学检测平台、互作组学技术平台、分子细胞生物学实验平台和抗体工程研究平台，并开展以此为基础的单项或整体课题服务。

订购须知:

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的； 2）产品包装以实物为准，网页图片仅作参考。