6-溴-2,3-二氢-1H-茚-5-胺盐酸盐 CAS 859

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

生长面积对培养液体积和转染试剂用量进行相应调整。 1、转染前 24 小时，将 293V 细胞以 4-5×106/10 cm 平皿密度接种，加入 10 ml 293V 培养基 37℃，5% CO2 培养。细胞转染前密度应达到 80-90%。 2、漩涡震荡混匀 Polyfect-V 转染试剂。 3、准备 2 个离心管，按以下顺序分别制备质粒和转染试剂稀释液。 离心管 1（质粒 DNA） 离心管 2（转染试剂） Cas9 慢病毒载体 5 μg