苯-1,2,4-四甲酰肼 CAS 24936-04-7

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

by CRISPR/Cas-mediated genome engineering. Cell 153(4):910-918. doi: 10.1016/j.cell.2013.04.025 24. Yang H, Wang H, Shivalila CS, Cheng AW, ShiL, Jaenisch R (2013) One-step generation ofmice carrying reporter and conditional allelesby CRISPR/Cas

5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计，Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1）CRISPR-cas9 最主要的要求：PAM 序列为 NGG。2）sgRNA，即 cas9  guide  RNA，是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割，所以一般是 20 个碱基，不含 PAM 序列。3）设计的 sgRNA 一定有效吗？一般设计

CRISPR/Cas9文库2.0升级版—助你快速、精准地做基因筛选

Cas9蛋白是一种以RNA为导向的DNA内切酶，是一种操纵基因组的强大工具[1]。更多的研究者获益于基于CRISPR的遗传筛查，对已确定的基因有更多基因功能表型的认识[2]。早在2013年，海外的两个研究团队分别在Science杂志同一期上发表了CRISPR文库的相关研究[3,4]。这是首次关于CRISPR文库的研究，显示出比shRNA文库更有效的筛选效果。但在文库设计初始，对sgRNA活性规则知之甚少，而非活性和非特异性的sgRNA会降低文库有效基因的覆盖率及靶基因的准确