IF-Lignt 驴抗小鼠IgG二抗，绿色标记（IF专用）

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy

R&D Systems 适用于神经细胞培养的无血清培养基添加剂

。 海马神经元表现出突触标记的可靠表达。e18大鼠海马神经元用添加了N21-MaX Media Supplement（目录号ar008）的培养基在体外培养21天。(a) 利用小鼠抗大鼠突触结合蛋白-1单克隆抗体（目录号MaB4364），以及Northernlights™ 557结合的驴抗小鼠igg二抗（目录号Nl007；黄色）对细胞染色，或(B) 利用小鼠抗人caM激酶iiα单克隆抗体（目录号MaB5584），接着用Northernlights™ 557结合的驴抗小鼠 igg二抗（目录号Nl

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性