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北京柏瑞图科技有限公司
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100ug
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文献和实验靠近 5』端的公共部分,保证每个 isoform 都会成功移码突变 通常情况下,为了便于下游 KO mutants 的鉴定,我们往往可以作如上设计:即 Cas9 的切割位点刚好被一个酶切位点跨过,且附近至少 100 bp 内酶切位点唯一。 为了减少 Off-Target 效应,请把设计好的 Target 放在括号中的网址里去做预测,尽量找到一条脱靶效应较小的来继续下游实验。 20 nt 确定之后,请
functions [ 16 – 18 ]. These studies demonstrated that Cas9 is a RNA-guided nuclease that is capable of binding to a targetDNA and introduce a double strand break in a sequencespecific manner, and its specifi city is determined by sequenceencoded
digested plasmid (cut 5 µg of plasmid in volume of 20 µl) 51 µl labeled oligo 10 µl 10X Taq Buffer 6 µl 25 mM MgCl2 10 µl DMSO 2 µl 10 mM dNTP's 1 µl Taq polymerase 14 cycles of PCR Run on 6-8% polyacrylamide/urea gel Cut out probe and elute S1
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