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文献和实验的合成是以Bop/HOBt为复合缩合剂,6.2倍过量的DIEA存在下进行的,收率高达80%。 3. 固相法合成环肽 固相法能够有效地避免环合过程中二聚、多聚等副反应的发生。早在60年代,Fridkin等就应用高分子载体来合成环肽[75]。线性多肽的C端羧基与树脂形成酯键而将线性肽挂在树脂上,脱去N端保护基后,以三乙胺中和,室温12小时后得到60%~80%收率的环肽,具体过程如下: 近年来发展起来的通过氨基酸侧链与树脂连接合成环肽的策略在环肽合成中应用广泛。对具有天冬氨酸或谷氨酸残基的线性
western blot详解,多年积累加上经验总结,觉得好就顶一下
水部分相结合,破坏其折叠结构,电泳样品假如样品缓冲液后,要在沸水中煮3-5分钟使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物,SDS-蛋白质复合物在强还原剂巯基乙醇存在时,蛋白质分子内的二硫键被打开而不被氧化,蛋白质也完全变性和解聚,并形成榛状结构,稳定的存在于均一的溶液中,SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷,平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子,这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖,远远超过其原来所带的电荷,从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计,消除了不同分子之间原有
聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)(图)
-为慢离子,采用三羟甲基氨基甲烷(简称Tris)作为缓冲配对离子。 电泳开始前,如图15-5A所示,慢离子位于两个电极槽中,快离子分布在三层凝胶中,样品在样品凝胶中,缓冲配对离子位于全部系统中。电泳进行中如图15-5B所示,快离子与慢离子的界面向下移动,由于选择适当的pH缓冲液,使蛋白质样品的有效迁移率(有效迁移率=mα,m为迁移率,α为解离度)介于快离子与慢离子的界面处,而浓缩成为极窄的区带。它们的有效迁移率按下列次序排列:mclαcl>mpαp>mGαG(Cl代表氯离子,P代表蛋白质,G
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