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文献和实验probe amplification,MS-MLPA) Anders O.H.等2005年改进MLPA[44]为MS-MLPA[45]用于检测特异位点的甲基化。MS-MLPA中,针对甲基化的和非甲基化的位点分别设计两个探针,每个探针都包括两个寡核苷酸部分,其中短的部分由合成产生,长的部分来源于phageM13的衍生物,后者有一个非杂交填充片段,不同探针其长度不同。探针的两个寡核苷酸杂交序列均与目标序列互补,其末端都连有相同的PCR引物。且要求[45]设计的MS-MLPA的探针要有甲基化敏感的限制性内切
浅析染色质免疫沉淀(ChIP)技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
-19]; xChIP:用来研究DNA及低结合力蛋白,采用甲醛或紫外线进行 DNA 和蛋白交联,超声波片段化染色质,然后进行片段富集及后续分析,适用于多数非组蛋白的蛋白,例如 [9, 15, 20]。 X-ChIP 试验的一般过程 以上两种方法在分离 DNA-蛋白质复合物之后,对 DNA 进行 PCR 扩增,验证目标序列的存在。除验证实验外,ChIP DNA也可以进行测序分析,这种方法被称为 ChIP-seq [22] ;也可做芯片分析,这种方法被称为 ChIP on CHIP 或 ChIP
的作用是调控基因表达。例如组蛋白甲基化多导致基因沉默,去甲基化则相反;乙酰化一般是转录激活,去乙酰化则相反。当然,也可在此基础上产生复杂的生物学效应。例如组蛋白去乙酰化酶 HDAC 可影响免疫系统;H3K4me3、H3K9me2 能够调控记忆的形成, 而且 H3K 甲基化与 X 染色体失活、基因组印记和异染色质形成有关;H3 乙酰化通过多种机制调控以来 ATP 的染色质重塑 ,并参与炎症反应;H2A、H2B 泛素化则与 DNA 损害反应有关;而 H3S28 磷酸化与 H3K27 乙酰化可激活转录
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