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文献和实验和PCR扩增系统必须保证有良好的扩增效果,有近似理论的扩增率,该报告分子与反应体系中可能存在DNA分子不应有同源性,以避免因DNA污染,而出现特异性扩增。继Sano用PUC19质粒后,国内外学者先后用PINM30、λ噬菌体、舌兰病毒等作为报告分子,取得了良好的效果。郑永晨研究发现线性化的腺病毒六邻体(AdAt)基因重组质粒非常适于做免疫PCR的报告分子。目前免疫PCR的报告分子多数是用DNA聚合酶将生物素化的碱基聚合到DNA末端,理论上一条DNA链上只标记一个生物素分子才具有最高的敏感性。AdAt质粒
催化 L-犬尿酸水解生成邻氨基苯甲酸与丙氨酸的反应的酶, EC3. 7. 1. 3,在肝脏、肾脏、细菌( Pseudomonas)和真菌( NeurosPora crassa)等中发现,细菌的酶是适应酶,而肝脏的酶不是适应酶。以磷酸吡哆醛为辅酶,透析则失活,加入辅酶又恢复活性,还为 Mg2 激活,最适 pH动物酶是 8.0,细菌的是 8.5。受 HCN、羟胺、氨基脲等的抑制,肝脏的酶分解 3-羟犬尿氨酸比犬尿氨酸为快,而细菌的酶分解犬尿氨酸最容易,而分解 5′ -和 3′羟犬尿氨酸
A细胞(可表达E1基因),使腺病毒能顺利完成复制扩增(图3)。大家可以根据自己的实验需求针对性选择,两种系统的具体特点比较见表1。 表1 腺病毒两种包装系统的对比 图1 AdMax系统包装原理示意图 图2 AdEasy系统包装原理示意图 图3 腺病毒包装过程示意图 那么有哪些腺病毒产品可供选择呢? 在此之前,我们先看看它是如何感染细胞的。首先,腺病毒衣壳主要由三种蛋白组成:六邻体蛋白、五邻体蛋白、纤突蛋白。每个五邻体蛋白上结合着一根纤突蛋白。在腺病毒感染细胞的过程中
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