1. 产品简介 Protein G能特异性地与抗体的Fc区结合,所以Protein G亲和介质可用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein G QZT 4FF亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,以重组Protein G为配基,具有很高的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便,应用广泛。
2. 产品特性 Protein GQZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。
表1 Protein G QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性
参数
指标
基质
4%交联琼脂糖凝胶
配基
Protein G
形状
球形
平均粒径
90 μm,分布45-165μm
配基密度
5-10 mg Protein G/ml wet gel
最高流速*
≥1000 cm/h
最高耐压*
≥0.10MPa (1bar)
pH稳定性
3-10(长时间);2-11(短时间)
保存
4-8 oC(20%乙醇)
*:层析柱20 cm × 1.0 cm I.D,填料高度10cm,常温,溶液为H2O的条件下测,耐压为扣除系统压力后的净压力。
3. 使用方法 Protein G QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡:用5~10CV的平衡缓冲液(20 mM PB+0.15M NaCl,pH 7.0,添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱:用洗脱缓冲液(20 mM柠檬酸,pH 2.5-3.5;或0.1M甘氨酸,pH 3.0;或20 mM乙酸钠,pH 3.0;具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关,效果不好时应进行洗脱缓冲液(种类和pH或添加剂)的优化)洗脱,收集流出液。洗脱后,应立刻用碱性缓冲液(如1M Tris/HCl, pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH,避免抗体失活,维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗:介质使用数次(5-10次,具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行再生、在位清洗。
(1)用0.1M的乙酸或0.1M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用;
(2)也可用70%乙醇或6M盐酸胍淋洗柱子3-5CV,并用3~10 CV的纯水冲洗,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。