乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，Ac

乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AchE）活性测定试剂盒

                                             分光光度法  50管/48样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

测定原理：

AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基ben甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基ben甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

 

生化试剂盒组成

生化试剂盒里的微量法和分光光度法，核心是两种不同的检测体系设计，二者在样本用量、仪器适配、操作流程和适用场景上有明显区别。下面从定义、核心差异、优缺点、适用场景等方面完整拆解。

一、基本定义

1. 分光光度法（常规比色法）

这是生化检测最经典、最通用的方法，基于朗伯 - 比尔定律：在稀溶液中，待测物质在特定波长下的吸光度，与物质浓度呈正比。试剂盒配套的反应体系体积通常较大，一般为毫升级别（mL），使用紫外可见分光光度计（普通分光光度计）检测，比色皿光程多为 1cm，是实验室常规生化指标检测的标准方案。

2. 微量法

属于分光光度法的微型化、微量化改良版本，本质依然遵循朗伯 - 比尔定律，只是为了适配微量样本和专用仪器，对反应体系、检测方式做了优化。反应体系体积大幅缩小，一般为微升级别（μL），通常几十到几百微升，必须使用酶标仪（微孔板分光光度计） 搭配 96 孔 / 384 孔板检测，光程远小于 1cm，通过试剂盒配套的公式校正吸光度与浓度的关系。

二、核心参数对比

对比维度	常规分光光度法	微量法
反应体系体积	mL级，常用 1~3 mL	μL级，常见 50~200 μL
样本需求量	大，样本消耗多	极小，仅需常规法的几十分之一
适配仪器	普通紫外可见分光光度计，使用标准比色皿	酶标仪，配套 96 孔 / 384 孔微孔板
检测通量	低，单次只能检测 1 个样本，批量检测耗时久	高，可同时检测几十上百个样本，适合高通量筛选
试剂消耗量	多，单样本检测成本偏高	少，试剂用量大幅降低，单样本成本下降
操作精度要求	相对宽松，体系大，移液误差影响小	高，体系微小，移液、加样误差会显著影响结果
结果稳定性	稳定性好，受操作误差影响小	对操作、仪器校准要求高，误差敏感度更高

三、两种方法的优缺点分析

常规分光光度法

优点

1. 技术成熟，结果稳定性和重复性好，是行业通用的参考方法，数据认可度高。

2. 操作容错率高，移液、温育等操作的微小误差，对最终结果影响有限。

3. 仪器普及率高，普通实验室都配备基础分光光度计，无需额外采购专用设备。

缺点

1. 样本和试剂消耗量大，对于珍稀样本（如临床微量体液、昆虫样本、细胞裂解液）无法适用。

2. 通量低，批量检测时效率低下，耗时耗力。

 

微量法

优点

1. 样本需求量极低，完美适配珍贵、微量、难以获取的样本。

2. 试剂消耗大幅减少，长期批量检测可降低实验成本。

3. 高通量检测，搭配酶标仪可同时完成大量样本检测，提升实验效率。

缺点

1. 对操作要求严苛，加样精度、温育条件、酶标仪校准都会直接影响结果。

2. 必须依赖酶标仪，没有酶标仪无法完成检测，仪器成本更高。

3. 因体系微型化，部分指标的检测下限、线性范围会与常规法存在差异，需要严格按照试剂盒说明书校正。

四、检测原理与操作的关键差异

光程与浓度换算

1.常规分光光度法使用 1cm 标准比色皿，计算公式直接使用标准朗伯 - 比尔定律，试剂盒提供的标准曲线、计算公式通用度高。

2.微量法使用微孔板检测，实际光程远小于 1cm，且受孔内液体体积影响，试剂盒会提供专属的校正系数，需要按照说明书的公式，将酶标仪测得的吸光度换算为实际浓度，不能直接套用常规分光光度法的计算方式。

操作流程

1.常规法：样本 + 工作液混匀→移入比色皿→分光光度计检测→记录吸光度→计算。

2.微量法：样本 + 工作液按微量比例加入微孔板→封口膜密封、振荡混匀→温育→酶标仪设定波长检测→利用试剂盒校正公式计算。

五、适用场景选择

优先选择常规分光光度法的情况

1. 样本来源充足，无样本量限制；

2. 实验室只有普通分光光度计，无酶标仪；

3. 追求高稳定性、高准确度，需要出具认可度高的检测数据；

4. 检测样本数量少，对检测通量无要求。

优先选择微量法的情况

1. 样本稀缺珍贵，如小鼠微量血清、细胞上清、植物微量组织、临床穿刺液等；

2. 需要批量、高通量检测，短时间内完成大量样本测试；

3. 实验室配备酶标仪，希望降低试剂耗材成本；

4. 高通量筛选、大规模样本初筛实验。

六、使用注意事项

1. 两种方法不可直接混用仪器，微量法试剂盒不能用普通分光光度计检测，常规法试剂盒也不适合直接用酶标仪微量检测，否则会导致结果偏差。

2. 微量法必须保证移液器精准校准，选择适配微量体积的移液器，避免加样误差。

3. 无论哪种方法，都要严格控制温育温度、时间，保证空白对照、标准品设置规范，才能保证结果可靠。

 

异常数据排查与处理

异常现象	常见原因	处理方法
标准曲线线性差 （R²＜0.99）	标准品配制误差、温育温度不均、底物显色不足	重新配制标准品，严格控制反应条件，延长显色时间（需验证线性）
样本浓度远高于标准曲线上限	样本未稀释或稀释倍数不足	对样本进行梯度稀释，重新检测
空白孔吸光度过高	试剂污染、仪器基线漂移、样本浑浊	更换试剂，校准仪器，对样本进行离心预处理
重复孔数据差异大	加样误差、反应体系混匀不均	优化加样操作，确保试剂与样本充分混匀，增加重复孔数量

 

五、结果判定与有效性原则

定量结果：仅当标准曲线 R²≥0.99、平行样 CV≤10%、空白值在试剂盒说明书规定范围内时，结果有效；超出检测线性范围的样本，需稀释 / 浓缩后重新检测； 

定性结果：根据显色 / 吸光度与阳性对照的对比判定，需设置阴 / 阳性对照，排除假阳性 / 假阴性； 

异常结果复核：单次检测结果显著偏离预期时，需重新检测样本 + 同步复核标准品，排查试剂、操作、仪器问题，而非直接判定结果。 

 

六、适用范围与注意事项

科研级生化试剂盒仅用于科研，不可用于临床诊断；临床检测需使用符合 IVD 标准的试剂盒，并在认证实验室操作； 

不同样本的基质效应需重视（如血清中的蛋白、离子会干扰部分反应），必要时设置样本基质对照（用无目标物的同类型样本稀释标准品）； 

部分试剂盒含腐蚀性 / 有毒试剂（如强酸、显色剂），操作时需戴手套、护目镜，做好防护。

生化试剂盒和ELISA试剂盒的区别

对比维度	生化试剂盒	ELISA试剂盒
核心原理	基于酶促反应或理化反应，通过检测反应体系的吸光度、酸碱度、浊度等理化性质变化，定量目标物含量（如酶催化底物显色、物质与试剂的特异性结合）	基于抗原抗体特异性免疫结合+ 酶促显色反应，通过抗体对目标抗原的精准识别捕获，再经酶标底物显色实现定量 / 定性
检测对象	以小分子、离子、酶活性为主，如葡萄糖、胆固醇、转氨酶、乳酸脱氢酶、无机离子等	以大分子生物活性物质为主，如蛋白、抗原、抗体、激素、细胞因子、病毒抗原等
特异性	依赖底物或试剂的化学特异性，特异性相对较低，易受样本中同类物质干扰（如检测某类酶时，其他酶可能交叉反应）	依赖抗体的免疫特异性，特异性极高，可区分结构相似的抗原（如不同亚型的蛋白），干扰小
灵敏度	中等，适用于中高浓度目标物检测（通常 μmol/L 级别）	极高，适用于微量 / 痕量目标物检测（通常 ng/mL~pg/mL 级别），可检测样本中极低含量的目标分子
操作流程	步骤简单，多为一步或两步反应，无需洗板；样本加试剂后孵育时间短（通常 10~30 min）	流程复杂，包含包被、封闭、加样、孵育、洗板、显色等步骤；洗板为关键环节（需去除未结合物质），全程耗时较长（通常 1~3 h）
所需仪器	主要用分光光度计、全自动生化分析仪	主要用酶标仪（部分需洗板机辅助完成洗板步骤）
适用场景	临床常规生化指标检测（如肝功能、肾功能、血糖血脂）、食品理化成分分析	临床疾病诊断（如抗体检测、肿瘤标志物筛查）、科研中蛋白定量、药物浓度检测、病原体检测等
样本基质影响	受样本浑浊度、脂血、溶血影响较大，需对样本进行预处理（如离心去杂质）	受基质效应影响较小，但样本中的杂蛋白可能导致非特异性吸附，需通过封闭步骤消除

 

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