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文献和实验【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤!!!(从验证到阳性克隆的筛选)
、Sal1 山梨醇 质粒抽提液:溶液1,溶液2,溶液3 酚:氯仿(1:1) rTaq、dNTP(2.5mM)、10×Buffer 上游引物VP5(25nmol/L):5’-TAGAATTCGCACCCATGGCAGAAGGAGG-3’ 下游引物VP3(25nmol/L):5’-TAGCGGCCGCTTACCGCCTCGGCTTGTC-3’ 4.仪器 电穿孔仪:Bio-Rad公司产品 Power/Pac 1000型电泳仪:Bio-Rad公司产品 Mini-垂直电泳槽:Bio-Rad
. DYCZ-24D型垂直电泳槽,北京六一仪器厂; 14. DYCZ-40A型转印槽,北京六一仪器厂; 15. EPS1001型电泳电源,Amersham Pharmacia公司; 16. 连续可调微量移液器,德国Eppendorf公司; 17. Delta-320-S型pH计,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司; 18. Primus 25型PCR基因扩增仪,德国MWG公司; 19. AlphaImager 2200型凝胶
种抗体吗?解答:免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇(又称表位),有些表位是线性的,而有的属于构象型;线性表位不受蛋白变性的影响,天然蛋白和煮后的蛋白都含有;构象型表位由于受蛋白空间结构限制,煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。(限于单抗)U. Western Blot 中抗体的重复应用问题解答:抗体工作
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