- ￥1280
- Proteintech
- PF00011
- 2026年02月02日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Proteintech
- 规格：
1kit
产品介绍
Proteintech的Foxp3/转录因子染色缓冲液试剂盒包含特殊配制的缓冲液和溶液，可在流式细胞术分析核抗原时获得最佳分辨率和低背景。该试剂盒包含以下组件，用于检测Foxp3等核抗原的染色方案。
|
组分 |
规格 |
|
Foxp3 / 转录因子固定/破膜浓缩液（4X） PF00011-A |
30 mL |
|
Foxp3 / 转录因子固定/破膜稀释液（1X） PF00011-B |
100 mL |
|
流式细胞术破膜缓冲液（10X） PF00011-C |
100 mL |
保存条件
4 ℃密封保存，6个月有效。详见产品标签。
使用方法
1. 准备工作液：
1）工作液D：取1份PF00011-A（Foxp3 / 转录因子固定/破膜浓缩液 4X）和3份PF00011-B（Foxp3 / 转录因子固定/破膜稀释液 1X）进行混合，混匀后备用。
2）工作液F：取1份PF00011-C（流式细胞术破膜缓冲液 10X）和9份超纯水混匀后，制备成流式细胞术破膜缓冲液（1X）备用。
2. 按照Proteintech的细胞表面流式细胞术的实验步骤中说明进行细胞表面染色。（如不需要进行细胞表面染色，略过此步骤。）
3. （表面染色后，洗涤，弃上清）每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D，缓慢吹打以确保细胞完全重悬。在室温下避光孵育45分钟。
4. 在室温下以 400-600g 离心5分钟，弃上清，向EP管中加入2 mL工作液F，缓慢吹打以确保细胞完全重悬，400-600g 离心5分钟，弃上清。
5. 将细胞沉淀重悬于 100 uL 工作液F中，静置10-15min。
6. 使用抗体推荐用量 如5 uL/Test（或使用工作液F对流式抗体进行预稀释），避光孵育抗体-细胞混合物30-45min，用于检测细胞内抗原。
7. 孵育完毕后，每管中加入2 mL工作液F。
8. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。
9. 每管中加入2 mL工作液F。
10. 在室温下以400-600g离心试管 5 分钟，然后弃上清。
11. 将细胞沉淀重悬于加入0.2 mL工作液F中。
12. 在流式细胞仪上采集样品。
注意
1. 本产品含有甲醛等有毒物质，使用时需要做好个人防护措施，佩戴手套、穿实验服等，以避免接触眼睛或皮肤。
2. 孵育时，使液体覆盖住细胞，不要使细胞粘在管壁，防止出现阴性群。
3. 实验过程中注意避光。
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文献和实验）固定能有效保留EYFP荧光，但FoxP3染色的强度和阳性细胞比例却明显下降。同样，CD8⁺ T细胞中T-bet的染色也显著减弱。在已知均一表达RORγt的双阳性（DP）胸腺细胞中，PFA固定严重削弱了RORγt信号；然而，在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统浸润的CD4⁺ T细胞中，IFN-γ和IL-17A的细胞因子染色在各种胞内染色方法下表现相似。为平衡荧光保留与转录因子检测，研究人员降低PFA浓度并调整固定时间，随后使用试剂盒的Perm缓冲液进行破膜。结果显示，延长固定
固定是为了保持组织/细胞和活的时候状态一致，在组织学研究中经常会用到。在流式染色中，有的时候也会用到固定，今天就和大家来聊聊流式实验中固定相关的一些常见问题。1. 流式实验中，哪些情况下需要对细胞进行固定处理？检测细胞内指标我们在流式胞内实验时，比如检测细胞因子（如 IFN-γ）或者核内转录因子（如 Foxp3）的时候，在样本染完表面指标后，一般需要先进行固定（或者固定破膜一起），然后再进行破膜（打孔）以及后续的胞内指标染色操作。延长样本的保存，获得充足的上机时间最常见的情况是染色处理完已经
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