CX-1人大肠癌细胞

细胞特性 1） 来源：肠 2） 形态：贴壁生长 3） 含量：>1x106 个/mL 4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装   运输和保存 可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式 （1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏； （2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 （3） 收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。   细胞用途： 仅供科研使用。                         细胞接受后的处理： 1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。 2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。 3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。 4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。 5）  接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。   细胞培养步骤 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。 3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。