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文献和实验可以用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。该方法往往被用于贴壁细胞的转染,也是最好的方法。 1. 试剂的配制 (1)2×HBS 1.63 g NaCl ;1.19g Hepes;0.023 g Na2 PO4 ·2H2 O;加水至100 ml pH 7.1 过滤,4℃保存 (2)2mmol/L CaCl2 过滤除菌 (3)TE:0.1mmol/L EDTA,1mmol/L Tris-HCL PH 8.0 (4)G418(新霉素G418)液:1g G418溶于
相关专题 1.G418的配制 : 方案一: 300mgG418加入3ml PBS 溶液,浓度为100mg/ml,完全溶解后,0.22um 过滤,-20℃保存。 方案二:(1)配制1M HEPES:23.8g HEPES(缓冲能力更强)粉末溶于100ml ddH2O,10N NaOH(加量较多)调节pH至7.3,过滤除菌 (较难过滤),4℃保存,终浓度为1mol/L。 (2)5g
,Rb,TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃,切片也预热至 37℃,消化时间约为 5~30 分钟(胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ); 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素(Saponin):一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液,消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原,其中有:Collagen
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