AAT Bioquest 12601 Amplite® Fl

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

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AAT Bioquest 12601 Amplite® Fluorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit *Green Fluorescence* 500 Tests，产品简介：
产品品牌：AAT Bioquest
产品货号：12601
产品名称：Amplite® Fluorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit *Green Fluorescence*
产品规格：500 Tests

产品说明：

吸光度（纳米） 487

校正系数 （260 nm） 0.32

校正系数 （280 nm） 0.35

消光系数（厘米-1M-1) 800001

激发（纳米） 498

发射（纳米） 517

量子产率 0.79001,0.952

大肠杆菌β-半乳糖苷酶是一种464 kD四聚体。β-半乳糖苷酶的每个单位由五个结构域组成，其中第三个是活性位点。它是细胞中必需的酶。这种酶的缺乏会导致半乳唾液分泌或Morquio B综合征。在大肠杆菌中，β-半乳糖苷酶由LacZ操纵子的活化产生。LacZ表达的检测已成为常规，每个细胞只需检测5个拷贝的？-半乳糖苷酶。该试剂盒使用荧光半乳糖苷酶底物，可以灵敏地区分 LacZ+ 与 LacZ 细胞。它既可用于检测 ELISA 型测定系统中的半乳糖苷酶偶联物，也可用于监测细胞中的 LacZ 基因表达。半乳糖苷酶裂解产物具有发射光谱，大多数配备FITC滤光片组的荧光仪器都可以检测到该光谱。

组件
组分A：荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷（FDG） 1瓶
组分B：反应缓冲液     1 瓶 （50 mL）
组件 C：停止缓冲区    1 瓶 （25 mL）
组分D：裂解缓冲液     1 瓶 （25 mL）
构成部分E：DMSO     1 瓶 （500 μL）
组分F：β-巯基乙* 1 瓶 （500 μL）

示例协议

一目了然
协议摘要

1. 用LacZ基因制备稳定或瞬时转染的细胞
2. 用测试化合物孵育细胞（样品）
3. 裂解细胞
4. 将裂解物转移到微量滴定板上
5. Add FDG working solution
6. 根据细胞类型在室温或 37°C 下孵育至少 5 分钟
7. 添加停止解决方案
8. 监测Ex/Em = 490/525 nm处的荧光强度

重要提示 使用前将所有试剂盒组件解冻至室温。

储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

FDG stock solution (1X)
将 125 μL DMSO（组分 E）加入 FDG（组分 A）小瓶中，制成 1X FDG 储备溶液。注意：25 μL FDG 足以用于 1 个板。避光保存。

标准溶液的制备
β-半乳糖苷酶标准品
可选（如果需要标准曲线）：用0.3%β-巯基乙*测定缓冲液制备β-半乳糖苷酶（大肠杆菌）标准品的连续稀释液。将标准曲线上每个点的 50 μL 等分试样转移到板的对照孔中。β-半乳糖苷酶的最高推荐量为 200 mU/mL （200 - 400 ng）。建议对由2个点组成的标准曲线进行8X连续稀释。注意：调整标准曲线以适应特定的实验条件，例如细胞类型、数量、转染效率和培养板的大小。每次进行测定时，必须新鲜制备标准曲线的稀释液。

工作溶液的制备
1. 0.3%β-巯基乙*测定缓冲液
将 30 μL β-巯基乙*（组分 F）加入 10 mL 反应缓冲液（组分 B）中，混合均匀。注意：制备酶稀释缓冲液需要额外的缓冲液，用于生成标准曲线。

2. FDG working solution
将 25 μL 1X FDG 储备溶液加入 5 mL 0.3 % β-巯基乙*测定缓冲液中。注意：不要将FDG溶液长时间保存在室温下，因为会发生自发水解。

3.裂解缓冲液工作液
使用前将 5 μL β-巯基乙*（组分 F）加入 5 mL 裂解缓冲液（组分 D）中。注意：在裂解细胞之前，始终将0.1%β-巯基乙*加入裂解缓冲液中

实验方案样本
表 1. 推荐的细胞培养板裂解缓冲液工作溶液体积。

培养板类型	裂解缓冲液工作溶液（μL/孔）
96孔板	50
24孔板	250
12孔板	500
6孔板	1000
60 mm 板	2000
100 mm 板	4000

制备哺乳动物细胞的细胞提取物

1. 用测试化合物处理含有LacZ基因的细胞一段时间。
2. 用1X PBS洗涤细胞两次。不要移开细胞。
3. 用裂解缓冲液工作溶液相应地裂解细胞。对于贴壁细胞：将裂解缓冲液工作溶液添加到培养板中。有关建议的卷，请参见表 1。对于非贴壁细胞：将细胞沉淀到离心管中，并向管中加入 50 - 2000 μL（取决于细胞沉淀的大小）裂解缓冲液工作溶液。
4. 将上一步的细胞在室温下孵育10-15分钟，并轻轻旋转板或试管数次以确保完全裂解。
5. 进行FDG测定或将样品冷冻在-80°C直至使用。注意：良好的裂解也可以通过快速冻融循环获得（在-1°C至-2°C下冷冻20-80小时，在室温下解冻）。或者，将细胞裂解液离心2-3分钟以沉淀不溶性物质，然后测定上清液。

运行 β-半乳糖苷酶测定

1. 如果需要，在室温下解冻裂解细胞的管或板。如果将细胞接种在96孔板中，则直接在96孔板上进行测定。
2. 将 50 μL 细胞提取物加入 96 孔板的每个孔中。如果需要标准曲线，请为标准曲线（50 μL/孔）保存一些对照孔。注意：如有必要，当转染效率非常高时，将裂解液稀释在裂解缓冲液工作溶液中，或在转染效率低时减少裂解缓冲液的体积。如果在96孔板中进行转染，或者将稳定的细胞系接种到96孔板中，则直接在板上进行测定。对于内源性β-半乳糖苷酶活性控制，从未转染的细胞中加入 50 μL 细胞裂解物。对于空白对照，加入 50 μL 1X 裂解缓冲液。
3. 向每个孔中加入 50 μL FDG 工作溶液。根据细胞类型，将板在室温或 37°C 下孵育约 5 分钟至 4 小时。
4. 向每个孔中加入 50 μL 终止缓冲液（组分 C）。终止缓冲液除了终止反应外，还会导致产物的荧光强度增加。
5. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处测量每个孔中溶液的荧光强度。
6. 根据线性标准曲线定量β-半乳糖苷酶表达。

以下是AAT Bioquest品牌部分产品订购信息，如需其他产品请联系本店客服

品牌	货号	产品英文	单位
AAT Bioquest	162	Cyanine 7 maleimide [equivalent to Cy7® maleimide]	1 mg
AAT Bioquest	175	Cyanine 5.5 maleimide [equivalent to Cy5.5® maleimide]	1 mg
AAT Bioquest	1023	iFluor® 488 succinimidyl ester	1 mg
AAT Bioquest	1029	iFluor® 594 succinimidyl ester	1 mg
AAT Bioquest	1030	iFluor® 633 succinimidyl ester	1 mg
AAT Bioquest	1074	iFluor® 647 amine	1 mg
AAT Bioquest	1144	mFluor™ Green 620 acid	5 mg
AAT Bioquest	1149	mFluor™ Violet 500 SE	1 mg
AAT Bioquest	1255	ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*	2 Labelings
AAT Bioquest	1299	ReadiLink™ Rapid FITC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*	2 Labelings
AAT Bioquest	1312	Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*	2 Labelings
AAT Bioquest	1315	Buccutite™ Rapid Protein Crosslinking Kit *Microscale Optimized for Crosslinking 100 ug Antibody Per Reaction*	2 Labelings
AAT Bioquest	1353	Buccutite™ Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*	2 Labelings
AAT Bioquest	1600	mFluor™ Violet 450 maleimide	1 mg
AAT Bioquest	2540	PerCP [Peridinin-Chlorophyll-Protein Complex]	10 mg
AAT Bioquest	2552	CL-APC [Cross linked-AlloPhycocyanin]	1 mg
AAT Bioquest	2554	APC [Allophycocyanin]	1 mg
AAT Bioquest	2555	APC [Allophycocyanin]	10 mg
AAT Bioquest	2558	PE [R-Phycoerythrin] *CAS 11016-17-4*	1 mg
AAT Bioquest	2582	ReadiUse™ Preactivated PE-Cy7 Tandem	1 mg
AAT Bioquest	2616	PE-Cy7 Tandem	1 mg
AAT Bioquest	2650	PerCP-Cy5.5 Tandem	1 mg
AAT Bioquest	4503	SMCC Plus™ *Enhanced water solubility, crosslinking efficiency and stability*	5 mg
AAT Bioquest	5356	Buccutite™ FOL, maleimide [FOLM]	2 umoles
AAT Bioquest	5358	Buccutite™ MTA, maleimide [MTAM]	2 umoles
AAT Bioquest	5522	Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit	200 Tests
AAT Bioquest	10056	Amplite® Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests
AAT Bioquest	10059	Amplite® Colorimetric Ammonia Quantitation Kit *Blue Color*	200 Tests
AAT Bioquest	10060	Amplite® Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests
AAT Bioquest	10070	Amplite® Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit	200 Tests
AAT Bioquest	10071	Amplite® Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit	200 Tests
AAT Bioquest	11115	Amplite® Colorimetric BCA Protein Quantitation Assay Kit	1000 Tests
AAT Bioquest	11116	Amplite® Colorimetric BCA Protein Quantitation Assay Kit	5000 Tests
AAT Bioquest	11305	Amplite® Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit	200 Tests
AAT Bioquest	11501	Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence*	500 Tests
AAT Bioquest	11503	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests
AAT Bioquest	11504	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence*	100 Tests
AAT Bioquest	11505	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*	100 Tests
AAT Bioquest	11506	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*	100 Tests
AAT Bioquest	11552	Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence*	500 Tests
AAT Bioquest	11553	Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*	500 Tests
AAT Bioquest	12505	D-Luciferin, potassium salt *CAS#: 115144-35-9*	25 mg
AAT Bioquest	12506	D-Luciferin, potassium salt *CAS#: 115144-35-9*	100 mg
AAT Bioquest	12601	Amplite® Fluorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit *Green Fluorescence*	500 Tests
AAT Bioquest	12603	Amplite® Fluorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit *Red Fluorescence*	200 Tests
AAT Bioquest	12604	Amplite® Colorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit	200 Tests
AAT Bioquest	13812	Amplite® Fluorimetric L-Lactate Dehydrogenase (LDH) Assay Kit	200 Tests
AAT Bioquest	13814	Amplite® Fluorimetric L-Lactate Assay Kit	200 Tests
AAT Bioquest	13815	Amplite® Colorimetric L-Lactate Assay Kit	200 Tests

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