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Bioyears
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10mg
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文献和实验后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括: ■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶(Ermolova 2003)——目标蛋白切除标签后用BDA(蓝色葡聚糖)亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。 ■ Xklp3a,Tep3Ag和E8R(De Marco 2004)——用蛋白酶切割后,His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除
高效离子交换色谱仪是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别实现分离的,固定相采用离子交换树脂,树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子,待测样品电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换。离子交换的一般形式为 R-A + B = R-B + A,达到平衡时,样品离子 B 对于 A 型树脂亲和力的大小可以用浓度表示的平衡常数表示,称为选择性系数 KB/A。 KB/A =([B]r[A])/([B][A]r) 式中:[A]r 为树脂中洗脱剂离子 A 的浓度,[B]r
与鉴定的植物基因的例子很多,其中有Fe(Ⅱ)转运蛋白基因IRTⅠ、Fe(Ⅲ)螯合物还原酶基因FRO2,拟南芥菜的NH4-transporter,西红柿中两个铁调控的离子转运蛋白cDNAs(LeIRT1,LeIRT2),玉米YS1(yellow stripel)基因以及大麦SFD1等。另外在研究钾离子通道蛋白方面结合定点诱变、随机诱变等对通道蛋白的结构及功能可作出很好的遗传分析。 三、实验原理 缺铁胁迫时,酵母主要通过高亲和系统来转运铁离子,有如下几个步骤:①转录
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