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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
● -20°C to -70°C for 12 months in lyophilized state; ● -70°C for 3 months under sterile conditions after reconstitution.For long term storage, the product should be stored at lyophilized state at -20°C or lower.
- 英文名:
Human CD300LG / Nepmucin Protein, His Tag
- 库存:
4///1
- 供应商:
ACROBiosystems
- 规格:
1mg/100ug
| 规格: | 1mg | 产品价格: | ¥16540.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100ug | 产品价格: | ¥2755.0 |
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文献和实验设计应遵循以下两点: 在C-端加入标签 使用长标签或者引入一段linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在,标签只能加在 C 端。8—10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度,进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段,直接加入去垢剂来溶解膜蛋白(不需要提前分离细胞膜),通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化,缩短实验时间。 分子筛 vS 离子交换 亲和层析之后,往往使用分子筛做最后的精纯,但如果杂质依然很多或者膜蛋白
蛋白纯化的方法很多,如层析法、电泳法、超离心法、超滤等,其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来,且纯度很高,因而备受实验者的青睐。 在进行蛋白表达时,选择合适的标签有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说,常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等,那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢? His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达
。为获得更高纯度,常规思路是使用分子筛或离子交换进行进一步纯化。除了应用不同层析策略外,我们还可以从标签设计入手,引入一个新标签以构建双标签蛋白,从而增加目的蛋白的特异性。 下图展示的是 E.coli 表达的双标签蛋白 StrepⅡ-六组氨酸-蛋白(相对分子量:约 15400)使用两步亲和层析进行纯化。首先使用 HisTrap HP 进行固定金属亲和层析(IMAC),再使用 Strep Trap HP 进一步亲和纯化。SDS-PAGE 结果清楚地论证了双标签法对获得高纯度蛋白的优势。 双标签
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