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- 中国
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- 2025年12月17日
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50
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北京沃比森科技有限公司
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1ml
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文献和实验CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理
微生物基因组编辑微生物被广泛应用于制药、农药生产、食品工业、能源以及一系列新兴的应用，通过对微生物开展基因组研究，不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因，并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造，在生物制药、污染治理、能源及化学品生物制造产业具有一定的应用价值。早期的菌种改造主要集中于随机筛选和简单的理性筛选，但是传统方法耗时、费力、工作量大且诱变结果不具定向性的缺点随着时间推移也逐渐暴露出来。随着现代分子生物学技术的发展，出现许多更具定向性和正突变性的菌种
以最火热的 p53 为例Step1 先找 p53 基因序列1. NCBI--输入 p53 并选择物种 human：tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2. Ctrl+F，输入 sequence，快速定位（当然其实拉下去就是了），点击 Genebank3. 下载 p53 基因序列4. 用 SnapGene 软件打开序列，并简单了解每个元件最好是可以学一下 SnapGene 这个软件的使用
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