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合肥博美
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2~8℃
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500ml
氯化锂乙醇饱和溶液
沉淀RNA
主要由氯化锂、无水乙醇组成。
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文献和实验min),75%乙醇洗沉淀,沉淀冷冻干燥,复溶于去RNA酶的水中(对于准备长期保存的RNA可加入pH 5.0的乙酸钠至终浓度为0.25 mmol/L,再加入2.5体积的乙醇,-70 ℃保存)。2、方法二氯化锂法提取总RNA 方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶,用氯化锂选择沉淀RNA,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。试剂:(1)氯化锂/尿素溶液:氯化锂126 g(3 mmol/L)尿素、360 g
的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸,再用氯化锂将RNA沉淀出来;直接在酸性条件下抽提,酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失,目前该方法的使用频率已很低实验步骤:破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。1、破碎织和灭活RNA酶可以同步进行,可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织,加入
地使核蛋白复合体变性;对内源 RNA 酶的有效抑制;有效地将 RNA 从 DNA 和蛋白混合物中分离;对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。 RNA 的提取目前阶段主要可采用两种途径 : 提取总核酸,再用氯化锂将 RNA 沉淀出来;直接在酸性条件下抽提,酸性下 DNA 与蛋白质进入有机相而 RNA 留在水相。 第一种提取方法将导致小分子量 RNA 的丢失,目前该方法的使用频率已很低。 实验步骤:
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