醋酸(E)-11-十四烯酯 （CAS:33189-72-9)

CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting

前期记录CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 目标基因背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- sgRNA 及引物设计CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 构建 sgRNA+Cas9 载体golden gate 构建好载体，酶切验证成功293FT 细胞转染验证1. sgRNA+pSpCas9 载体用 lipofectamine 3000 转染至 293FT 细胞（按照转染试剂的说明书走），确保转染效率> 70

环肽的合成方法

起来的。Joullie在合成天然环肽生物碱Sanjoinine G1和其C11位对映异构体时在环合步骤中就应用了五氟苯酚酯法。首先以D-丝氨酸为原料，经多步反应得到环合前体，用五氟苯酚活化羧基，N端苄氧羰基经氢解脱掉后，以4-吡咯烷吡啶为催化剂，在二氧六环中回流，最终得到两个互为异构体的混合物，收率分别为27%和22%。另外，海洋生物环肽Patellamine B以及对纤维蛋白酶和丝氨酸蛋白酶有强烈抑制作用的环肽Cyclotheonamide A的环合步骤也是应用了五氟苯酯法，收率分别是20

CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导

基本原理CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫，用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列，引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂，如下图所示。通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造，将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。通过将表达 sgRNA