1,3,5-苯三甲酰氯 （CAS:4422-95-1)

构建人类基因组CIRSPR文库

动物模型构建CRISPR-Cas9 系统作为最新一代基因编辑技术，能够简便高效地实现基因组精确 修饰，是制备哺乳动物疾病模型的重要工具。目前科学家利用 CRISPR-Cas9 技术在动物模型，如小鼠、大鼠、猪 和猴等研制方面做出一系列重要工作。如科学家们将 CRISPR-Cas9 系统导入小鼠受精卵，成功获得了有特定基因突变的小鼠模型，并获得近乎 100% 的基因靶向突变效率，极大地降低了基因编辑小鼠模型制备的难度和成本，有望被广泛应用。背景：使用自主研发的sgRNA设计平台为一个基因位点设计

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

2 Cas9 - 2 hitKO 系统三、Cas9 - 2 hitKO 系统中涉及到的载体为了达到高效的敲除效率，我们在同一个载体重引入 cas9 酶和两个向导性 RNA。整个系统包括 3 个载体： PX458M ，PX459M 和 EZ-GuideXH。PX458M ，PX459M 除了含有 Cas9 和一个向导性 RNA 插入位点，还引入第二个向导性 RNA 插入位点。EZ-GuideXH 是为插入第二个向导性 RNA 的辅助性载体。PX458M 带有 EGFP 荧光标记; PX459M 带有

构建多基因敲除动物模型，一切如此简单

到的，假如单独敲除这三个基因都没有表型，那我岂不是前功尽弃？那么大的投入可能会没有任何回报，我真的着急了。 好在邦耀给出了一个看起来可行的方案：Cas9在两个位点切开形成双链断裂之后，细胞会启动NHEJ的修复方式将断裂的双链DNA连接起来，这样会有一定概率删除两个靶点之间的序列。我的这个小鼠虽然跨度为95Kb，但他们相信设计2个sgRNA，将中间片段整基因组删除应该是可以成功的。 经过2个月焦虑不安的等待，我终于等到了好消息：95Kb的片段成功的在F0代小鼠里面删除了，而且同时得到了2只