无血清无DMSO细胞冻存液

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3341 

产品名称：无血清无DMSO细胞冻存液 

产品规格：100 ml 

品牌介绍: 

  北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。
 

百奥益康的无血清无DMSO细胞冻存液配方成分明确，不含动物来源性蛋白或血清，不含DMSO，专为对血清和DMSO敏感的细胞设计，不仅适用于常规细胞系、原代细胞，同时亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。该产品采用优化的配方，避免血清和DMSO可能带来的副作用，同时采用独特的冻存保护剂，确保细胞在冻存和解冻过程中的高存活率。

 

产品优势

避免污染，不含血清成分：不含动物血清，从源头降低污染和变异的可能性，确保样本纯度，降低实验风险。

不含DMSO，无毒性：不含二甲基亚砜（DMSO），对细胞无毒性，安全性高。

成分明确，配方优选：所有成分严格筛选、定量，保证了产品品质的稳定性；优化配方，含营养物质、添加剂和保护剂，维持细胞存活与功能。

细胞存活率高：冻存配方优化，复苏后细胞存活率高。

广泛适用性：适用于多种细胞类型，包括但不限于干细胞、肿瘤细胞、免疫细胞、转化细胞系等。

可满足无血清实验需求：为需严格排除血清影响的研究提供理想选择，助力精准实验。

 

 

测试效果

我们对新鲜制备的小鼠PBMC样本进行了实验，结果显示冻存不同时间的PBMC样本复苏后仍表现优异。

 

 

测试流程：

 

 

 

 

 

 

 

测试结果：

PBMC样本冻存不同时间后悬液质检结果

 

 

 

 

产品 FAQ

1.    Q：冻存对 DMSO 极度敏感的小鼠胰岛 β 细胞时，按常规 1×10⁶ cells/mL 密度重悬，复苏后细胞活性仅 45%，远低于预期的 70%，是什么原因导致的？该如何调整冻存密度？

A：敏感细胞在高浓度下易因细胞间挤压受损。调整方法：①将冻存密度降至 5×10⁵ cells/mL，减少细胞间相互作用；②重悬时用低吸附枪头轻轻吹打 10 次（常规 15 次），避免细胞机械损伤；③冻存管选择 1.8mL 规格（常规 1mL），增加液体体积以降低细胞浓度，可使复苏后活性提升至 68% 以上。

 

2.    Q：按步骤将冻存管放入程序性冻存盒后，-80℃冰箱降温 24 小时，转移液氮时发现冻存盒内部分冻存管盖子松动，导致液体渗漏，是什么原因？该如何避免渗漏？

A：渗漏多因冻存管盖未拧紧或冻存盒内温度波动导致盖子收缩。解决方法：①旋紧冻存管盖时，按 “顺时针拧至紧后回拧 1/4 圈” 操作，避免过度拧紧导致盖子变形；②放入冻存盒前，用 parafilm 膜缠绕冻存管盖与管身连接处（仅包裹接口处，不影响散热）；③转移液氮时，快速将冻存管从冻存盒取出（暴露时间＜30 秒），直接浸入液氮，可使渗漏率降至 5% 以下。

 

3.    Q：复苏人 PBMC 细胞时，按步骤 37℃水浴融化后，滴加至温浴的 RPMI 1640 培养基中，离心后发现细胞沉淀松散，弃上清时约 30% 细胞流失，该如何优化复苏操作？

A：沉淀松散因 PBMC 对温度变化敏感，滴加速度过快导致细胞应激。优化方法：①融化后的冻存液滴加时控制速度（1mL 冻存液滴加时间≥1 分钟），每滴间隔 5 秒，同时轻轻摇晃离心管；②离心前在培养基中加入 20μL 1% BSA（自备），增强细胞聚集性；③将离心转速从 300×g 提高至 350×g，离心时间延长至 8 分钟，可使细胞损失率降至 10% 以下。

 

4.    Q：试剂盒开封后，冻存液在 - 20℃避光保存 14 个月，使用时发现复苏细胞活性从 90% 降至 60%，是试剂失效了吗？该如何快速验证试剂有效性？

A：冻存液有效期为 1 年，超期后保护成分易降解。验证方法：①取 100μL 冻存液与 100μL 含 1×10⁵ HeLa 细胞的悬液混合，按常规步骤冻存 - 复苏；②若复苏后活性＜70% 且细胞形态异常（如皱缩），说明试剂失效；③若活性在 70%-80% 之间，可将冻存液用量增加 1.2 倍，延长 - 80℃冰箱降温时间至 36 小时，活性可提升至 75%，可用于基础实验（不建议干细胞冻存）。

 

5.    Q：冻存原代神经干细胞时，按步骤重悬后发现细胞易结团（团块直径＞50μm），导致冻存后复苏细胞分散困难，是什么原因？该如何避免细胞结团？

A：神经干细胞本身易黏附结团，重悬方式不当会加剧聚集。解决方法：①重悬时用 1mL 低吸附枪头反复吹打 20 次，每次吹打后静置 1 分钟，让大团块自然沉降，吸取上层单细胞悬液；②在冻存液中加入 50μL 0.01% 透明质酸酶（自备，无细胞毒性），降低细胞黏附性；③冻存管分装后轻轻颠倒 3 次，避免细胞沉底结团，可使复苏后单细胞比例提升至 85% 以上。

 

6.    Q：复苏时发现水浴锅温度波动至 40℃，冻存液融化后立即处理，复苏后细胞活性从 88% 降至 52%，是温度过高导致的吗？该如何挽救受损细胞？

A：40℃会破坏细胞膜完整性，导致活性下降。挽救方法：①将融化后的冻存液立即转移至冰上静置 5 分钟，降低细胞代谢速率；②复苏用培养基提前预冷至 4℃，滴加冻存液时在冰浴条件下进行；③离心后用含 10% FBS 的培养基重悬，37℃孵育 30 分钟再进行后续操作，可使活性恢复至 65% 左右（仅适用于耐受较强的细胞系）。

 

7.    Q：冻存悬浮细胞（如 Jurkat 细胞）时，按常规 300×g 离心 5 分钟，弃上清后发现细胞沉淀中仍有大量上清残留，导致冻存密度偏低，该如何解决离心残留问题？

A：悬浮细胞离心后易形成松散沉淀，上清残留影响密度。解决方法：①离心后用移液器轻轻吸除上层可见上清，再将离心管倒置在无菌吸水纸上（管口朝下），静置 30 秒，沥干残留液体；②若沉淀仍松散，可加入 50μL 冻存液先重悬，再补加剩余冻存液，确保密度准确；③冻存后标记实际密度，复苏时按比例调整培养基用量，可使密度误差控制在 10% 以内。

 

8.    Q：没有程序性冻存盒时，用 “-80℃冰箱梯度降温法”（室温→4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃ 24 小时）冻存细胞，复苏活性仅 55%，该如何优化无冻存盒的降温操作？

A：无冻存盒时降温速率过快，细胞易受冰晶损伤。优化方法：①在离心管外包裹 3 层无菌纱布（减缓降温速度），再放入 - 80℃冰箱；②4℃静置时间延长至 1 小时，-20℃静置时间延长至 2 小时，使降温速率接近 1℃/min，可使复苏活性提升至 75% 以上。

 

9.    Q：复苏后细胞培养时，发现培养基中出现少量白色絮状物（非细菌污染），怀疑是冻存液残留导致的，会影响细胞生长吗？该如何去除絮状物？

A：絮状物多为冻存液中蛋白成分与培养基反应产物，少量不影响细胞生长。去除方法：①复苏离心后，用含 5% FBS 的培养基清洗细胞 2 次（常规 1 次），每次清洗后离心 300×g 5 分钟；②若仍有絮状物，将细胞悬液通过 40μm 细胞筛过滤 1 次，可去除 95% 絮状物，细胞损失率＜3%；③后续培养时观察细胞形态，若无异常增殖缓慢，可正常使用。

 

10.    Q：冻存不同类型细胞（如 HeLa 细胞、原代肝细胞）时，是否需要调整冻存密度？具体该如何设定不同细胞的冻存密度？

A：不同细胞增殖能力与耐受度不同，需差异化设定密度。建议密度：①贴壁细胞（如 HeLa、CHO）：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL，贴壁能力强，高密度冻存可提升复苏后贴壁率；②原代细胞（如肝细胞、心肌细胞）：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL，原代细胞活性易受影响，低密度可减少细胞间竞争；③悬浮细胞（如 Jurkat、THP-1）：2×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL，悬浮细胞易流失，高密度可确保复苏后细胞数量，可根据细胞类型调整密度以达到最佳复苏效果。

 

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的