5-(氰基(噻吩-2-基)甲基)-N,N,1,3-四甲基-1

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（下）

2.2.10 DNA微阵列法 Yan等2001年[40]将以分子杂交为基础的微阵列技术应用于DNA甲基化检测中，这种方法是基于杂交的寡核苷酸微阵列，是一种在基因组中寻找新位点的方法。包括用于整个基因组范围内扫描的差异甲基化（DMH）杂交（Huang等1999年[41]）和用于检测某个位点的甲基化特异性微阵列MSO（Gitan等2002年[42]）。前者类似于mRNA表达谱或cDNA微阵列，是CpG岛微阵列，后者类似于寡核苷酸微阵列，是针对CpG二核苷酸位点的甲基化特异性寡核苷酸微阵列[26

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（上）

盐处理和单核苷酸引物延伸（Kuppuswamy等1991年提出[29]）的Ms-SnuPE方法[30]，用于定量检测已知序列中特异位点的甲基化水平。过程是：先将研究序列用重亚硫酸盐处理，未甲基化的胞嘧啶全部转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。进行PCR扩增，然后取等量扩增产物置于2管中，分别作为Ms-SnuPE单核苷酸引物延伸的模板。设计用于Ms-SnuPE延伸的引物的3’端紧邻待测碱基。同时于2个反应体系中加入等量的Taq酶、引物、同位素标记的dCTP或dTTP。这样，如果待测位点被甲基化，则同位

30多种PCR技术

(ISSR-PCR)： 序列间特异性PCR：一种DNA指纹图谱技术，所选的引物定位在基因组的片段重复区（如Alu族），扩增后产生基于不同产物长度的唯一的指纹图谱。8、Ligation-mediated PCR： 连接介导PCR，首先使用小的寡核苷酸接头连接靶DNA片段，然后选择与接头结合的PCR引物来扩增未知的靶片段。这一技术主要用在DNA测序、染色体步移技术（genome walking）和DNA指纹图谱等。9、Methylation-specific PCR (MSP)： 甲基化特异