- ¥1490
- 再康生物
- ZK-0025880
- 国产/进口
- 2025年11月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Heterakis isolonche
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
Heterakis isolonche. PCR Kit
Taq：扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶，其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为 10-5 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克隆。
Pfu：目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶，碱基出错率为 10-6，但扩增效率低于 Taq 酶， 一般能很好的扩增 2kb 以下的片段。其扩增速度约为 500bp/min 左右。其产物为平未端，须加 A后才可用于 TA 克隆。
Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比 Pfu 高， 保真度比 Taq 好。其扩增速度约为 1000bp/min 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的 PCR MasterMix 反应完后 加入上样缓冲液后电泳检测。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 自然感染雉异刺线虫LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 自然感染雉异刺线虫PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 自然感染雉异刺线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 自然感染雉异刺线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增自然感染雉异刺线虫，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 自然感染雉异刺线虫PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 自然感染雉异刺线虫PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） |
试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 核酸释放剂（试用装） | 试剂五 | 20 次（1 mL，绿盖） |
| 使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂：样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 自然感染雉异刺线虫PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18 μL | -- |
| PCR 阳性对照（自然感染雉异刺线虫PCR阳性对照的 1000 倍稀释液） |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应（35 个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
自然感染雉异刺线虫PCR试剂盒常见问题与解决方法:
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 |
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验按蚊 Anopheles sinensis 3．甲壳纲（Crustacea） 虫体分头胸部和腹部，有触角2对，步足5对，大多数种类水生，有些是蠕虫的中间宿主。例如淡水蟹或�蛄是并殖吸虫的第二中间宿主；淡水桡足类（copepods）中的剑水蚤（Cyclops）、镖水蚤（Diaptomus）是阔节裂头绦虫、曼氏迭宫绦虫、棘颚口线虫及麦地那龙线虫（Dracunculus medinensis）等的中间宿主。 剑水蚤 Cyclops 4．唇足纲
，产未受精卵，使自然种群逐渐减少。在遗传防制中，有辐射、化学杂交不育、胞质不亲和、染色体易位等方法。目前还在研究和小规模现场试验，推广应用尚待努力。 五、病媒节肢动物的判断 1．生物学的证据 ①与人的关系密切，必须刺吸人血，或舐吸人的食物；②数量较多，往往是当地的优势种或常见种类；③寿命较长，能保持病原体完成发育和增殖所需的时间。 2．流行病学证据 其地理分布及季节消长与某种虫媒病流行地区以及流行季节相一致。 3．自然感染的证据
，有一对短粗交合刺，相等同型，末端有小钩。雌虫大小为5.5～6.5×0.07mm，尾端呈锥形，阴门位于虫体后1／6处，子宫内含虫卵5～16个。虫卵长圆形,无色透明，大小为80～100×40～47µm，似钩虫卵而略长，直径一般超过横径2倍以上, 一端较圆，另一端较尖，一侧常较另一侧稍隆起。卵壳很薄，卵膜密接于卵壳内面，但在两端可见空隙，尤以尖细端明显。新鲜粪便中的虫卵，一般多见卵细胞已分裂为10～20个细胞（图16－23）。 图16－23 东方毛圆线虫
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