Protein G-coupled Agarose Affi

蛋白A或蛋白G琼脂糖亲和介质由结合了蛋白A或蛋白G的4%浓度的交联珠状琼脂糖介质组成。由于采用了重组表达的高纯度蛋白A或蛋白G，并去除了其白蛋白结合区，这类介质能够特异性地结合多种免疫球蛋白的Fc段，故可作为亲和吸附剂，用来纯化多种来源的抗体和抗体亚型，以及在免疫共沉实验中捕获免疫复合物。蛋白A/G琼脂糖亲和介质由等体积的蛋白A和蛋白G琼脂糖介质混合而成，适用于纯化来源或亚型不明确的抗体，免去摸索纯化条件所浪费的时间和材料。上述产品具有高特异性、高吸附力的特点，每毫升介质可特异性结合10~20 mg抗体。

用途
• 抗体纯化
• 免疫共沉淀
特点
• 高特异性：对抗体有专一的亲和力
• 高吸附力：每个蛋白A或蛋白G分子含有4个抗体结合域
• 高结合量：每毫升介质可结合约20 mg抗体
• 高度灵活：可填装任意品牌的柱子

储存条件
4℃保存，有效期一年；切勿冻结！

主要成分
50% Protein A/G-Agarose亲和介质悬液，20%乙醇，PBS

使用方法
1．抗体纯化实验流程：
1） 将适量琼脂糖亲和介质装入层析柱，用3~5倍体积的100 mM Triscl, pH8.0洗涤平衡。
2） 含抗体的血清或其他体液高速离心后，将上清缓慢加入层析柱。
3） 用5~10倍体积的100 mM Trisci, pH8.0洗涤，再用5~10倍体积的10 mM Triscl, pH8.0洗涤，至流出液无蛋白检出。
4） 用100 mM Glycine, pH3.0洗脱，获得的纯化抗体加入1/5体积的1 M Triscl, pH8.0中和。

2．免疫共沉实验流程：
1） 细胞或组织用RIPA或其他适合的裂解液充分裂解，高速离心，收取上清。
2） 取适量琼脂糖亲和介质，用PBS清洗两遍，重悬于PBS中。
3） 每0.5 ml裂解液加入40 μl亲和介质重悬液，4oC混匀孵育10分钟。
4） 高速离心，转移上清至新离心管中。
5） 加入适量抗体至经过预结合的上清中，4oC混匀孵育2 小时。
6） 每0.5 ml含抗体的上清加入40 μl 亲和介质重悬液，4oC混匀孵育1 小时或过夜。
7） 高速离心5秒钟，去除上清；用800 μl RIPA或PBS重悬洗涤介质，重复3次。
8） 加入20~40 μl 1x SDS-PAGE上样缓冲液重悬介质；煮沸5分钟后高速离心，取适量上清电泳。